Prosedur Pemeriksaan Virus Avian Influenza
SEROLOGI : HI TEST
Bahan dan alat :
1. Virus AI standard 4 HAU
2. Suspensi sel darah merah ayam 0,5% dalam NaCl
fisiologis (PBS pH 7.4)
3. Serum kebal AI
4. Microplate U bottom
5. Mikro
Pipet
200
µl
6. Mikro tip
PROSEDUR ( HI Test mikro titrasi)
Sumur 1-12 dari microplate U bottom diisi dengan
suspensi virus standar (4 HAU) masing-masing 50
µl dengan
mikropipet kapasitas 200
µl .
1. Ambil
50
µl serum yang akan diuji dan masukkan ke
dalam sumur pertama. Lakukan pencampuran serum
dengan suspensi virus di sumur pertama dengan cara
mengambil dan mengeluarkan cairan tersebut dengan
mikropipet, lakukan cara ini paling tidak lima kali (
jangan sampai berbuih ).
2. Ambil
50
µl dari sumur pertama kemudian pindahkan ke
sumur ke dua dan lakukan pencampuran sama seperti
tersebut di atas, selanjutnya pindahkan 50
µl ke sumur
ke- 3, begitu seterusnya sampai sumur ke 12. Dari sumur
ke-12 diambil 50
µl dan dibuang. .
3. Goyang-goyangkan microplate kemudian inkubasikan
pada suhu ruang selama 15 menit.
4. Tambahkan
50
µl suspensi sel darah merah 0,5 % ke
dalam seluruh sumur .
5. Goyang-goyangkan microplate, kemudian inkubasikan
pada suhu ruang selama kurang lebih 30 menit, kemudian
dibaca hasilnya.
PEMBACAAN HASIL
Pembacaan hasil uji dapat dilakukan apabila eritrosit pada
tabung kontrol telah mengendap ke dasar sumur. Batas nilai
titrasi adalah pengenceran tertinggi dari antibodi yang masih
dapat menghambat aglutinasi dikalikan titer virus standarnya.
Titer antibodi dihitung dengan cara sebagai berikut :
Titer HI = end point x HA unit virus standar yang
digunakan.
ISOLASI VIRUS AVIAN INFLUENZA
1. 1 ml suspensi throat swab + 1000 IU Penicillin + 1000
mcg Streptomycin
2. Inokulasi 0,2 ml pada telur berembrio umur 10-11 hari
bebas vaksin AI secara intra allantoic
3. Inkubasi pada temperatur kamar selama ½ - 1 jam
4. Ambil cairan allantois 5-10 ml
5. Lakukan
passage 2 kali lagi untuk menyatakan positif
atau negatif
6. Lakukan uji hemaglutinasi atas cairan tersebut bila positif
untuk menentukan kadar virus/antigen
7. Lakukan uji hambatan hemaglutinasi untuk menentukan
tipe dari hasil isolasi terhadap antisera
Tabel 1. Diagram HI test
Sumur ke :
Reagen
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
Virus
standar
50 50 50 50 50 50 50 50 50 50
50 50
50 50 50 50 50 50 50 50 50 50
50 50
Serum kebal AI
RBC
0,5%-
1% 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50
50 50
Pengenceran Ab*
1/2
1/4
1/8
1/16
1/32
1/64 1/128 1/256 1/512 1/1024 1/2048 1/4096
Hasil
+ + + + + - - - -
-
Titer Ab
2
4
8
16
32
-
-
-
-
-
- = ada aglutinasi + = tidak ada aglutinasi
* Catatan: nilai pengenceran antibodi merupakan pengenceran dengan virus standar, penambahan suspensi RBC tidak dihitung
sebagai pengenceran
Cermin Dunia Kedokteran No. 152, 2006 57