Cermin Dunia Kedokteran

TEKNIK BARU

Penentuan Potensi Vaksin Pertusis

Menggunakan Beberapa Grup Mencit

Siti Sundari Yuwono, Edhie Sulaksono

Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan, Departemen Kesehatan RI, Jakarta

ABSTRAK

Vaksin yang digunakan dalam program imunisasi hams memiliki potensi yang me-

menuhi persyaratan yang telah ditetapkan oleh WHO. Untuk mengetahui hal tersebut

harus dilakukan uji kualitas vaksin. Sedangkan pengujian vaksin sangat dipengaruhi

oleh mutu mencit yang dipergunakan.

Tujuan penelitian ini adalah memilih grup mencit yang dapat dipergunakan untuk

pengujian vaksin pertusis dengan kepekaan yang tinggi dan memenuhi syarat-syarat yang

telah ditetapkan. Grup mencit yang dipakai ialah grup CBR, BD, YG, dan SBY, masing-

masing 730 ekor mencit. Pengujian potensi vaksin dengan cara challenge. Pemeriksaan

dilakukan pada masing-masing grup sampai kelahiran ke 5.

Hasil penelitian menunjukkan bahwa mencit yang memenuhi syarat adalah grup

CBR dengan potensi rata-rata 10,8 (9,412,2) dan grup SBY dengan potensi rata-rata 9,9

(6,8-13,0). Dengan demikian grup mencit tersebut dapat dipergunakan untuk pemeriksaan

vaksin pertusis.

PENDAHULUAN

Penyakit pertusis merupakan penyakit yang dapat dicegah

dengan imunisasi DPT. Banyak faktor yang dapat mempenga-

ruhi program tersebut; di antaranya pelaksanaan operasional,

rantai dingin dan vaksin yang digunakan. Vaksin yang digunakan

hams memenuhi persyaratan yang telah ditetapkan, di antaranya

yang penting adalah potensi vaksin. Potensi yang memenuhi

syarat dapat memberikan perlindungan yang diharapkan. Peng-

ujian potensi vaksin sangat tergantung dari keadaan, mutu hewan

yang digunakan.

Penelitian ini merupakan pengujian potensi vaksin pertussis

yang digunakan untuk program imunisasi pada beberapa grup

mencit dengan cara pemeriksaan potensi secara challenge.

Maksud penelitian ini untuk membandingkan grup mencit

yang dipelihara di beberapa laboratorium dengan mencit staridar

yang digunakan untuk pemeriksaan vaksin pertusis.

BAHAN DAN CARA KERJA

Vaksin

Vaksin pertusis yang digunakan dan PN Biofarma dengan

no batch 81238 yang sama.

Hewan percobaan

Terdiri dari beberapa grup mencit yaitu CBR; BD; SBY dan

YG, yang berasal dari beberapa laboratorium, masing-masing

dikembangkan di Puslit Penyakit Menular dengan perlakuan

pemeliharaan yang sama.

Grup mencit SBY di tempat asal dibiakkan dalarn jumlah

yang besar, digunakan untuk pemeriksaan vaksin hewan dan

pemeriksaan laboratorium. Grup YG dipelihara dalam jumlah

kecil untuk pemeriksaan laboratorium. Grup BD dipelihara da-

lam jumlah yang besar untuk pemeriksaan vaksin sedangkan

grup CBR dipelihara dalam jumlah yang besar untuk pemeriksaan

vaksin.

Untuk penentuan LD

dipakai 50 ekor mencit dan untuk

penentuan potensi diperlukan 96 ekor mencit. Setiap grup me-

Cermin Dunia Kedokteran No. 104, 1995 57

merlukan 730 ekor, dihitung sampai kelahiran ke 5.

Tabel 1. Angka LD terhadap pertusis dan mencit CBR, BD, YG, SBY

sampai kelahiran kelima

Persiapan kultur bakteri

CBR BD YG SBY

Kelahiran

Dosis LD

Dosis

766 67 399 125 204 245 685 7522

1070 48 187 267 344 130 466 107

III 635

285

175

161 360 1234 40

690 72 194 257 195 255 754 68

478 104 80 625 98 618 640 77

Satu ampul bakteri Bordetella pertussis kering dilarutkan

dalam 0,1 ml casamino acid 1%, kemudian ditanam pada media

Bordet-Gengou, diinkubasi 4 hari dengan temperatur 3537°C.

Kemudian dilakukan pasase 2 kali selama 2 hari pada tempera-

tur yang sama.

Ambil koloni dan kultur persediaan, kemudian ditanam

pada media BU, diinkubasi selama 1 822jam. Kemudian dibuat

suspensi sejumlah 10 bilion/ml (1 ml larutan dimasukkan ke

dalam media agar tersebut, ditambah 4 ml casamino acid).

Dibuat 5 macam pengenceran, yaitu; 2 x 10

, 2 x 10

4 x 10

, 8 x 10.

Tabel 2. Potensi Vaksin Pertusis pada Beberapa Grup Mencit

Potensi (IU/ml)

Kelahiran

CBR BD YG SBY

8,8 9,6

1,916,9

1,3 8,4

6,915,8

11,615,4

1,415,4

1,1 6,2

6,3 8,0

III 9,411,9

8,512,7

6,614,8 7,0

9,6

IV 9,713,2

2,614,0

3,113,6

8,215,3

V 8,912,0

2,319,6

4,4

9,3

5,616,5

Cara pemeriksaan LD

Lima puluh ekor mencit masing-masing dibagi dalam lima

kelompok, masing-masing 10 ekor mencit, kemudian disuntik

secara intraserebral dengan pengenceran 50000, 10000, 2000,

400 dan 80 kuman dengan dosis 0,03 ml. Pengamatan dilakukan

terhadap hewan yang mati selama 14 hari. Selanjutnya dilakukan

penghitungan untuk mengetahui dosis yang dapat menyebabkan

kematian mencit sebanyak 50%; angka ini digunakan untuk

challenge pada pemeriksaan potensi.

Dari hasil tersebut di atas maka grup CBR dan SBY sampai

kelahiran ke lima tidak mengalami perbedaan dan memenuhi

syarat. Sedangkan grup BD harga antaranya sangatjauh dan grup

YG, masih memerlukan waktu yang lebih lama untuk dapat di-

pergunakan dalam pemeriksaan vaksin.

Cara pemeriksaan potensi

Penindukan untuk pembiakan berikutnya, diambil dari ke-

hamilan ke tiga sehingga diperoleh keturunan yang baik.

Sembilan puluh enam ekor mencit dengan berat 14-16 gram

dari masing-masing grup, separuh berjenis jantan dan separuh

betina. Pemilihan mencit dilakukan secara random, dibagi dalam

enam kelompok, masing-masing 16 ekor. Tiga kelompok per-

tama diimunisasi secara intraperitoneal dengan standard na-

sional pertussis dengan pengenceran berkelipatan lima yaitu

berturut-turut berisi 1,0; 0,2 dan 0,04 IU/ml dengan dosis 0,5 ml;

tiga kelompok berikutnya diimunisasi dengan vaksin yang akan

diperiksa dengan pengericeran 1; 1/4; 1/16 dengan dosis 0,5 ml

secara intraperitoneal. Setelah empat belas hari diimunisasi,

mencit di challenge dengan 0,03 ml Bordetella pertussis secara

intraserebral dengan dosis 50.000 kuman. Pengamatan dilakukan

selama empat belas hari untuk melihat mencit dengan gejala

pertussis ataupun hewan yang mati. Kematian mencit pada hari

pertama tidak diperhitungkan. Penghitungan potensi secara

Wilson-Wochester dilakukan dengan membandingkan hasil

vaksin yang diperiksa terhadap standard. Vaksin pertusis me-

menuhi syarat bila potensi serendah-rendahnya 8 IU/ml.

KESIMPULAN

Berdasarkan basil penelitian, grup mencit CBR dan SBY

dengan pemeliharaan sampal kelahiran ke lima, masih dapat di-

gunakan untuk pemeriksaan potensi vaksin pertusis. Sedangkan

dua grup lain masib memerlukan pemelihanaan yang lebih lama

sebelum dapat dipergunakan untuk pemeriksaan potensi vaksin

pertusis.

Untuk menjamin hasil percobaan yang baik, disarankan

menggunakan mencit dan anak kelahiran ke dua dan ke tiga.

UCAPAN TERIMA KASIH

Kami mengucapkan terima kasih kepada Kepala Puslit PenyakitMenular,

Badan Penelitian Pengembangan Kesehatan yang telah membantu terselengga

ranya penelitian ini.

Ucapan terima kasih juga kepada teman sejawat, sehingga penelitian ini ter-

laksana

KEPUSTAKAAN

HASIL DAN PEMBAHASAN

1. Bellanti. Immunology. Asian ed. Philadelphia. London. 1971; 4144.

Tabel 1 menunjukkan hasil pemeriksaan LD

dan lima

kelahiran berturut-turut terhadap kuman pertusis pada beberapa

grup mencit. Kepekaan terhadap pertusis pada grup mencit CBR,

BD, YG dan SBY berbeda nyata.

2. Kurokawa H, Takahashi K, Ishida K. Statistical analysis in biological assay,

2nd ed. Tokyo: Kindai shippan, 1978.

3. Manclark CR. Microagiutination procedure for Bordetella pertussis anti-

bodies, 1980.

4. Mulyati Priyanto. Penetapan standarnasional vaksin DPT. Penetapan standar

vaksin pertussis. Bul Penelit Kes, 1982; X(2): 8.

Pada Tabel 1 tenlihat tidak ada penbedaan pada mencit CBR

sampai kelahiran ke lima; pada SBY juga tidak ada perubahan

dan memenuhi persyaratan. Pada YG dan BD angka LD50 me-

nunjukkan angka kuman yang rendah.

5. Murata R, Perkins FT. Pittman M, Scheibel, Sladky K. International Colla-

borative Studies on the Pertussis Vaccine potency assay. Bull WHO, 1971;

44: 67387.

6. WHO. Manual for the production and control of vaccines. Pertussis vaccine.

BLGIUNDP/77.3Rev.1. 1977.

Hasil pemeriksaan potensi vaksin pertusis pada ke lima

grup m dapat dilihat pada Tabel 2. Vaksin yang sama diperiksa

pada grup mencit : CBR, BD, YG dan SBY.

7. WHO. Expert Committee on Biological Standardization. Requirement for

pertussis vaccine. WHO Techn. Rep. Ser, 1964; 274: 2540.

Cermin Dunia Kedokteran No. 104, 1995