Cermin Dunia Kedokteran

Perkembangan Va

ksin Dengue-2

Dr. Emiliana Tjit

yakit Menular, Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan,

Departemen Keseha

Jakarta

ra, MSc.

sat Penelitian Pen

tan R.I.,

Virus Dengue adalah jenis virus dari grup Flavivirus yang

mempunyai 4 serotipe Dengue1, Dengue2, Dengue3, dan

Dengue4. Bentuk infeksi virus Dengue dapat berupa Dengue

Fever (DF), Dengue Haemorrhagic Fever (DHF) atau Demam

Berdarah Dengue (DBD), dan Dengue Shcok Syndrome (DSS).

Penyakit ini terutama menyerang anak-anak dengan gejala

demam tinggi mendadak, dapat disertai manifestasi perdarahan

dan bertendensi menimbulkan syok dan kematian (Depkes RI,

1986).

Penyakit ini ditularkan melalui gigitan nyamuk terutama

Aedes aegypti, tetapi dapat juga melalui Aedes albopictus,

Aedes polynesiensis dan Aedes scutellaris (WHO, 1986).

A. aegypti

dan A. albopictus terdapat hampir di seluruh pe-

losok Indonesia sehingga memungkinkan seluruh daerah Indo-

nesia terjangkit infeksi Dengue, terlebih dengan semakin

majunya perhubungan: dan ramainya lalu lintas manusia

antara daerah. Sampai saat ini hanya pemberantasan vektor

yang dapat dilakukan untuk pencegahan infeksi virus Dengue,

di man cua tersebut kurang efektif (Eckels dkk, 1980).

Untuk itu diusahakan cars pencegahan lain yaitu dengan

vaksinasi.

Kekebalan manusia terhadap virus Dengue dengan jenis

antigen yang sama merupakan kekebalan seumur hidup. Oleh

sebab itu vaksin virus Dengue yang hidup diduga juga

menghas0kan kekebalan yang berlangsung lama. Seisms daya

lindung antara serotipe virus Dengue terbatas, maka penye-

liddcan vaksin setiap serotipe virus (monovalen) dibutuhkan

sebelum inelangkah ke vaksin multivalen.

Di Thailand dan Kuba, virus Dengue-2 adalah serotipe

yang utama menimbulkan wabah DHF/DSS dan banyak meng-

akibatkan kematian (WHO, 1986).

Oleh karena itu diharapkan

adanya vaksin virus ideal yang dapat memberi kkebalan

kepada semua orang, dan menghasilkan antibodi yang dapat

memberi daya lindung lama serta tanpa menimbulkan efek

samping bagi sipenerima.

VAKSIN DENGUE

Penelitian vaksin Dengue2 hidup yang dilemahkan sudah

imulai sejak tahun 1971 di Walter Reed Army Institute of

Research dan Universitas Hawai (Halstead, 1980).

Virus

Dengue ini didapat dari seorang laki-laki di Puerto Rico pada

tahun 1969 dan di-inokulasikan pada sel PGMK (Primary

GreenMonkey Kidney) sebanyak 19 kali. Salah satu clone

yang terbentuk yaitu S1 mempunyai sifat-sifat sebagai

berikut: menghasilkan plague kecil pada sel LLCMK2, ke-

ganasan penyakitnya menurun pada tikus dan monyet, sensitif

terhadap perubahan suhu dan menunjukkan penurunan

pertumbuhan di dalam biakan monosit manusia (Eckels dkk,

1976).

Setelah pencucian, dilalui 4 kali pada DBSFRhL2

(sel diploid paru-paru dari janin rhesus). Vaksin virus Dengue-

2 tersedia dengan label DEN2 (PR159/S-1) lot no: 1 dalam

bentuk lyophilized, kemasan 3 ml, dengan cara pemberian

subkutan, pada legan atas kiri, hasil produksi Departement of

Biologics Research, Walter Reed Army Institute of Research,

Washington, D.C(Bancroft dkk, 1981)

PENELITIAN VAKSIN DENGUE2 PADA "RHESUS

MONKEY " (SCOTT dkk, 1980)

Pada Tabel 1, 10 rhesus monkey (grup A) divaksinasi de-

ngan vaksin Dengue2 dosis rendah yaitu 1,2 x 10

PFU per

0,5 ml dari AFRIMS, dan 5 rhesus.monkey (grup W) lainnya

dengan dosis tinggi yaitu 3,8 x 10

PFU per 0,5 ml dari WRAIR

secara subkutan. Setelah imiinisasi pertama ini, hanya 1 rhesus

monkey yang menderita viremia yaitu dari kelompok yang

divaksinasi dengan dosis tinggi. Ternyata virus yang diketemu-

kan pada rhesus monkey dengan viremia tersebut mempunyai

sifat-sifat pertumbuhan yang sama dengan strain virus vaksin.

Sedangkan imunisasi yang dilakukan tidak menimbulkan gejala

penyakit apapun pada rhesus monkey tersebut. Seluruh rhesus

monkey yang menerima vaksin dengan dosis ti gi (W), dan 5

dari 10 penerima vaksin dosis rendah (A) membentuk antibodi

(neutralizing antibodies). Sifat antibodi vane terbentuk tidak

menetap dan timbul pada hari ke 30.

Setelah 4-

6 bulan dari vaksinasi I, 9 rhesus monkey (4A

dan 5W) tersebut diberi 0,5 ml virus Dengue2 ganas (BM 50

76 : 1,1 x 10

PFU; 21868 : 6 x 10

PFU; PR 159 : 3 x 10

PFU), ternyata antibodi yang sudah terbentuk tidak

melindungi atau membebaskan timbulnya viremia. Walaupun

NDAHULUAN

Cermin Dunia Kedokteran No. 50, 1988

Tabel 1 : Hasil NA (Neutralizing Antibody) terhadap pemberian vaksin/virus

DEN2 pada rhesus monkey (Scott dikk, 1980)

ng kebal terhadap

croft dkk, 1981)

* viremia pada hari ke 7.

Tabel 2: Hasil klinis, virologi, dan imunologi dari 6 sukarelawan y

yellow fever setelah pemberian vaksin DEN2 (PR159/S1). (Ba

terhadap manusia yang sebelumnya

sudah atau belum mendapat infeksi

terhadap Flavivirus (vaksinasi

yellow fever). · Penelitian virologi,

imunologi, dan klinik dari 6

sukarelawan dewasa yang kebal

terhadap yellow fever (Bancroft

dkk, 1981)

GMT (geometric mean titer) DEN-2 pada hari ke 30 = 180.

titer rendah, tetapi menetap dan

dapat melindungi rhesus monkey

tersebut pada pemberian virus

-76, 2 X

ah vaksi-

Sedangkan nyamuk Aedes

aegypti yang diberi darah rhesus

monkey yang sudah divaksinasi

dengan Dengue-2 dosis rendah

nfektif.

Dengan tidak adanya efek sam-

ping dan gejala-gejala penyakit,

kemungkinan kecil vektor menjadi

infektif, dan peningkatan kekebal-

an setelah imunisasi II, maka

vaksin Dengue-2 (PR-159/8-1) da-

pat dicoba pada manusia.

n dengan infeksi yang

egitu rhesus monkey yang diimunisasi membentuk antibodi

s Dengue-2 ganas tersebut dan tidak

satu

hadap 3 Rhesus lainnya (grup A) dengan 0,5 ml virus Dengue-

2 (1,2 X 10

PFU). Antibodi yang terbentuk walaupun dengan

wan menderita viremia pada hari ice 8-9 setelah vaksinasi yang

berlangsung selama 110 hari. Timbulnya viremia disertai

Dengue-2 ganas (BM 50

PFU) 10 bulan setel

nasi ulangan tersebut.

tidak menjadi i

PENELITIAN VAKSIN DENGUE

2 PADA MANUSIA

Menurut Schlesinger dkk

(1956)

, manusia yang mendapat

kekebalan dari vaksinasi yellow

fever lebih tinggi antibodi neutra-

lizingnya dibandingkan dengan

yang tidak divaksinasi yellow

fever. Juga infeksi Dengue alami-

ah menghasilkan titer antibodi

yang lebih tinggi pada penderita

yang sebelumnya mendapat infeksi

Flavivirus lainnya (Scott dkk

1972)

. Sedangkan menurut Rus-

sell dkk (1973)

, infeksi Dengue

yang kedua lebih berat penyakitnya

dibandingka

pun menunjukkan gejala-gejala penyakit Dengue.

etelah 4 bulan vaksinasi I, dilakukan vaksinasi ulangan ter-

pertama. Oleh sebab itu perlu

dilakukan penelitian vaksin DEN-2

Enam sukarelawan dewasa

yang mempunyai fIsik dan nilai

laboratorik normal serta sudah

mendapat vaksinasi yellow fever

sebelumnya, dan juga tidak mem-

punyai antibodi DEN-2, diberi

vaksinasi 0,5 ml DEN-2. (PR-159J

S-1) dengan dosis 4,5 X 10

PFU

terhadap sukarelawan I dan sedangkan ke 4 lainnya diberi:

2,5 X 10

setelah pemberian viru

PFU.

Semua sukarelawan menunjukkan gejala klinis dan yang

teringan pada sukarelawan ke 3 yang pemah menderita penya-

kit Dengue (DEN-4), 11 tahun yang lalu (Tabel 2). 5 sukarela-

Cermin Dunia Kedokteran No. 75, 1992 49

i K d k

50 1988 49

dengan dem

lekopenia yang sement

karelawan), dan rash (1 sukarela-

wan). Seorang sukarelawan men-

derita panas, sakit kepala, sakit

otot, lemah dan fotofobia yang

diduga menderita Demam De-

ngue (DF) ringan. Ke 5 sukarela-

wan yang viremik, meningkat

antibodi netralisingnya lebih dari

4 kali. Sedangkan sukarelawan

ke 3 mempunyai titer antibodi

netralising yang rendah (NA =

20) dan menetap, tetapi titer

(HIA (Hemagglutination Inhibi-

ting Antibody) meningkat dari

< 10 menjadi 40. Isolasi virus di-

ambil dari plasma dengan sifat-

sifat seperti virus vaksin. Ter-

Tabel 3: Jumlah sukarelawan yang viremia dan NA

DEN2 (PR159/S1) dengan berbagai macam

am (3 sukarelawan),

ara (4 su-

> 10 Welsh pemberian vaksin

clods (Scott dkk, 1983)

* Yellow Fever Immune

** Yellow Fever Nonimmune

nyata vaksinasi yellow fever yang didapat terdahulu tidak

menghambat infeksi oleh vaksin DEN-2.

Jadi vaksin DEN-2 (PR-159/S-1) cukup aman, infeksius,

imupogenik, dan balk untuk menentukan dosis optimal serta

respon dari orang-orang dewasa yang belum mendapat

avivirus.

Dungue-2 . Respon dosis vaksin dalam

ubungannya dengan status kekebalan yellow fever dari suka-

lawan

Vaks

dewasa untuk dievaluasi keamanan, infektivitas, dan imunoge-

nisitas pada dosis 10

PFU. Ke 38 sukarelawan ter-

sebut dikelompokkan dalam: kelompok Yellow Fever Immune/

WI (20 sukarelawan) yaitu yang mempunyai NA (Neutralizing

Antibody) terhadap yellow fever vaksin (YFV) lebih atau sama

dengan 10, dan kelompok Yellow Fever Nonimmune/YFN (18

sukarelawan) yaitu dengan NA terhadap YFV kurang dari 10.

Vaksin DEN-2 diberikan 0,5 ml, pada setiap sukarelawan

dengan dosis yang berbeda (Tabel3).

Ternyata kekebalan yang timbul berhubungan dengan

dosis van. diberikan (p < 0,001) pada kelompok YFI dan ID

(Immunizing Doses) yang dihitung dengan cara Reed dan

Muench

adalah 10

3,3

PFU. Sedangkan pada kelompok YFN

kekebalan yang timbul tak berhubungan dengan dosis vaksin,

dan ID

nya tak dapat diperkirakan.

Pada grafik 1 terlihat sukarelawan YFI membentuk NA

terhadap DEN-2 dengan titer yang

adekwat dan bertahan

sampai 3 tahun. Sedangkan sukarelawan YFN membentuk NA

lebih rendah dan menghilang dalam 6 bulan pada 9 orang

(50%) sukarelawan YFN. Lebih 40 isolasi virus dari 12 sukare-

lawan, tumbuh invitro dengan sifat-sifat yang sama dengan virus

vaksin. Hal ini menunjukkan bahwa virus vaksin tersebut stabil

ijumpai adalah

lekopenia (55%), macular rash (15%), dan demam (10%). .

dan ber-

Grafik 1 : Geometric Mean Ti

penerima vaksin DEN

(Sco

kekebalan terhadap Fl

Penelitian vaksin

dewasa (Scott dkk, 1983)

in DEN-2 (PR-159/S-1) diteliti pada 38 sukarelawan

genetiknya. Tanda-tanda klinis yang sering d

Dari hasil penelitian di atas disimpulkan bahwa vaksin

DEN-2 (PR-159/S-1) aman, stabil dan dapat digunakan untuk

penelitian yang lebih luas. Perbedaan kekebalan yang disebab-

kan adanya infeksi Flavivirus sebelumnya, sesuai

hubungan dengan beratnya gejala dan timbulnya antibodi

terhadap Flavivirus, serta waktu diberikannya YFV. Oleh

sebab itu sudah saatnya dilakukan penelitian dengan kontrol-

ter (GMT) Neutralizing Antibody dari

2(PR159/Si) selama 1 tahun

tt dkk, 1983).

Waktu

(bulan)

setelah

vaksinasi

g luas untuk menghindari data yang

a statistik.

ue-2 : Reaktogenisitas dan Imuno-

ra (Bancroft dkk, 1984)

plasebo : double-blind yan

valid dalam penilaian secar

Penelitian vaksin Deng

genisitas pada tentara-tenta

Penelitian klinik doubl

vaksin DEN-2 (PR-159/S

ti harus bebas dan tidak pernah menderita pe-

nyak

e-blind dengan kontrol plasebo dari

-1) dilakukan untuk mengetahu

reaktogenisitas dan imunogenisitas vaksin tersebut. Sukarela-

wan yang diteli

it Dengue serta tidak ada antibodi terhadap virus Dengue

(serotipe 14). Mereka dikelompokkan berdasarkan ada tidak-

nya antibodi terhadap yellow fever, dan vaksinasi dengan 0,5

ml vaksin DEN-2 (PR-159/S-1), dengan dosis : 10

4,1

5,4

PFU/0,5 ml (GMD=iO

4,9

PFU).

Cermin Dunia Kedokteran No. 50, 1988

Ternyata 90% dari 70 sukarela

yellow fever (NA lebih besar atau s

dari 21 sukarelawan yang tidak keb

menghasilkan serokonversi terhadap v

besar atau sama dengan 20) dalam

berbeda bermakna : p < 0,01 (Tabel

Tabel 4. Respon NA (Neutralizing Antibod

terhadap imunisasi DEN2 (Bancr

Kelompok berdasarkan

adanya antibodi ter-

hadap yellow fever

Jumlah

Jum

dalam

wan yang k

ama dengan 20)

al terhadap yellow fever

aksin DEN-2 (NA lebih

waktu 6 bulan, dan ini

4).

y) dari penerima vaksin

oft dkk, 1984)

lah NA> 1 : 20

6 bulan (% )

ebal terhadap

dan 61%

1. Vaksin DEN2

positip

negatip

2. Plasebo

positip

negatip

63 (90)

<0,01

17 (60,7)

Total

147

Pada Tabel 5 terlihat bahwa puncak titer NA terhadap

va sin DEN-2, lebih tinggi 3 kali pada kelompok yang kebal

terhadap yellow fever dibandingkan kelompok yang tidak

kebal, dan umumnya menetap' minimal selama 18 bulan.

Sukarelawan-sukarelawan yang menghasilkan serokonversi

terhadap vaksin DEN-2 lebih sering menderita gejala-gejala

sistemik (seperti: menggigil, sakit perut, sakit kepala, demam,

keringat pada malam hari, mual-mual, nafsu makan berkurang)

dibandingkan yang menerima plasebo (p < 0,05).

Tabel 5. Titer NA (Neutralizing Antibody) dari

80 penerima vaksin

DEN2 (PR159/S1)*

Titer NA

Kelompok berdasarkan

adanya antibodi ter-

Jumlah

hadap yellow fever

Sebelum

vaksinasi

Sesudah

vaksinasi

1 bl

2 b1 3 bl

Positip

Negatip

<10

564

399

149

<10

117

<10

* Bancroft dkk, 1984.

Dari hasil-hasil penelitian diatas terlihat bahwa untuk men

dapatkan kekebalan dari vaksin DEN-2 masih diperlukan

imunisasi pendahuluan yellow fever, dan ada efek samping

yang berhubungan dengan dosis vaksin.

PENELITIAN VAKSIN DENGUE-2 PADA NYAMUK

AEDES AEGYPTI (Bancroft dkk, 1982)

Dari penelitian terdahulu pada manusia, 5 dari 6 penerima

vaksin DEN2 menerita viremia. Mengingat hal itu dilakukan

penelitian untuk mengetahui apakah vektor utama Dengue:

Aedes aegypti dapat terinfeksi vaksin virus dengan menghisap

um pernah

terinfeksi Flavivirus, dan dapat menularkan secara invitro (cara

Gubler dan Rosen, 1976)1 S . Sifat-sifat pertumbuhan virus

hasil isolasi dari nyamuk juga dievaluasi. Antigen dari tubuh

nyamuk diketahui dengan cara Kuberski dan Rosen'

Dari Tabel 6 terlihat bahwa dari satu koloni nyamuk Aedes

aegypti yang dilepas menghisap darah penderita viremik, hanya

2 dari 14 nyamuk yang terinfeksi virus vaksin. Virus yang

diketemukan dari tubuh nyamuk dan darah penerima vaksin

mempunyai sifat yang sama dengan virus vaksin DEN2.

Sedangkan antigen Dengue tak diketemukan pada bagian

kepala nyamuk dengan Direct Immunofluorescence, dan

penularan virus in vitro dengan droplet fedding tidak

diketemukan.

Tabel 6. Infeksi nyamuk Aedes aegypti dengan menghisap darah

penerima vaksin DEN2 (PR159/S1) yang viremik

penderita viremik dari penerima vaksin yang bel

(Bancroft dkk,1982)

yamuk menghisap dar

** Saat n

Penerima Dosis vaksin

Hari

Previremia

Selama viremis

vaksin PUF/0,5

viremia

Kenyang

Infeksi Kenyans

Infeksl

2,8 x 10

3,0

x 10

1014

915

12,14,16

Total

114

* nyamuk menghisap darah pada hari ke 13.

** jumlah nyamuk.

Dari hasil penelitian diatas ternyata vektor (A edes aegypti)

dapat terinfeksi dengan vaksin virus dengan menghisap darah

penerima vaksin yang viremik, sedangkan vektor tampaknya

tak dapat menularkan, dan virus vaksin berifat stabil.

KESIMPULAN DAN SARAN

Vaksin virus DEN2 (PR-159/S1) hanya memberi ke-

kebalan 61% pada orang dewasa yang tidak mempunyai ke

kebalan terhadap heterologos Flavivirus, kekebalannya hanya

berlangsung kurang dari 6 bulan dan tampak gejala-gejala

Dengue ringan pada penerima vaksin. Sedangkan nyamuk

Aedes aegypti walaupun dapat terinfeksi setelah menghisap

etapi tak dapat me

darah penerima vaksin yang viremik t

ularkan.

Jadi meskipun vaksin DEN2 (PR

159/SI) bukan me-

rupakan vaksin yang ideal tetapi masih dapat digunakan untuk

or ng dewasa yang besar kemungkinannya mendapat infeksi

virus Dengue2. Sedangkan pada orang-orang yang tidak kebal

terhadap flavivirus, imunisasi yellow fever dapat diberikan

sebagai imunisasi pendahuluan untuk mendapatkan kekebalan

yang tnaksimal terhadap vaksinasi Dengue2.

RINGKASAN

Penelitian vaksin virus DEN2 (PR159/S1) telah di-

lakukan terhadap rhesus monkey, manusia dewasa yang kebal

Cermin Dunia Kedokteran No. 75, 1992 51

dan

lan dan tampak gejala-

ejala Dengue ringan (seperti: menggigil, demam, sakit kepala,

saki

in.

ngka

kebalan

Flavivirus memberi kekebalan 90%

(

g ta

heter

gos

Fla

01), kekebala

ukup lama

sampai lebih dari 18 bulan, titer antibodinya 3 kali lebih tinggi

g tidak k bal terhadap h erologos Flav irus

), dan han

beberapa

engeluh seperti

ue ringan.

ksin virus DEN2 (PR159 1) adalah vaksin

eal.

Ucapan terima kasih saya sampaikan kepada Ibu Dra. Hariyani

Marw

ak Drh Suharyono MPH atas bimbingan dan sarannya dalam

penu

andt WE. Immunopathologjc processes and viral

antigens associated with sequential dengue virus infections. Petspse Virol

11.

Scott R

ine : Dose

response in volunteers

er immune status. J Infect

Dis 1983; 148 (6) : 10551060.

12.

Reed LJ, Muench HA. A si ple m

points. Am J Hy 1938; 27 : 493497.

ckels

Den

49 (

010.

14.

roft W

randt WE, a

L Dengue2 vaccine:

tion of

gypt

itoes

*ant

cipien

p Med

; 3

15.

Gubler DJ, Rosen L. A si

hnique for demonstrating trans-m

of dengue virus by mosq

itho

e use

hosts.

ique for the detection of dengue

uitoes by immunofluorescence. Am J Trop Med Hyg 1977;

26 : 533537

tidak kebal terhadap infeksi Flavivirus (yellow fever), serta

pada nyamuk Aedes aegypti. Dart penelitian-penelitian

tersebut, ternyata vaksin virus DEN2 (PR-159/SI) hanya

memberi kekebalan 61% pada orang dewasa yang tidak mem-

punyai antibodi (kekebalan) terhadap heterologos Flavivirus,

kekebalannya bertahan kurang dari 6 bu

t perut; mual-mual dan sebagainya) pada penerima vaks

n pada penerima vakrtn yang mempunyai ke

Seda

erhadap heterologos

rbeda bermakna d gan yan

k kebal terhadap

olo

vivirus, p < 0,

nnya bertahan c

dibandingkan yan

(yellow fever

yang m

pen akit D

eng

Jadi Va

yang tidak id

Ucapan Terima Kasih

oto dan Bap

lisan ini

KEPUSTAKAAN

Departemen Kesehatan R.I., Direktorat Jenderal PPM & PLP.

Demam Berdarah : Diangosa dan Pengeioiaan penderita 1986.

WHO. Dengue Haemoorhagic Fever : Diagnosis, treatment and

control Geneva : 1986.

Eckels KH, Harrison VR, Summers PL, Russell PK. Dengue2 vaccine :

Preparation from a small-plaque virus clone. Imfect Immun 1980; 27 (1) :

175180.

Halstead SB. Dengue haemorrhagic fever a public health problem

and a field for research. Bulletin of the WHO 1980; 58 : 1445,

Eckels KH, Brandt WE, Harmon VR, Wood JM. Russel PK.

Isolation of a teapesature-sensitive dengue2 virus under con-

ditions suitable for vaccine development. Infect immun 1976;

14 : 12211227.

Bancroft WH, Top FHJr, Eckds KH, Anderson JHJr, McCown JM,

Russeel PK. Dengue2 vaccine : Virological, Imtaunci.gieal, and

Clinical Responses of Six Yellow FeverImmune Recipients. infect

Immun,1981; 31 (2) : 698703.

Scott TMcN, Nisalak A, Eckels Kill, et aL Dengue2 vaccine :

Viremia and Immune Responses in Rhesus Monkeys. Infect immun

1980;27(1):181186.

Schlesinger RW, Gordon I, Frankel JW, et 4 Clinical and serologis

response of man to immunization with attenuated dengue W yellow fever

virusses. Journal of Immunology 1956; 77 : 352364.

Scott RMcN, McCown JM, Russell PK. Hunan Imxnuneglobulin

specificity after group B arbo rtes infections. Infect linmun 1972;

6 : 277281.

10.

Russell PK, Br

975; 7 : 263277.

.McN, Eckels KH, Brancroft WH, at aL Dengue2 vacc

in relation to yellow fev

ethod for estimating fifty percent e

Bancroft WH, Scott R cN, E

KH, et aL

gue Vifus Type

Vaccine

1984; 1

Reactogenicit

6) : 10051

and Imm

unogenicity in Sold ers. The J Infect Di

anc

H, Scott

McN, B

t a

nfec

Aedes ae

i mosqu

by feeding on

ic re

ts. A

Tro

Hyg 1982 1 (6) : 122

231

mple tec

uitoes w

ission

ut th

of ver brate

Trop Med Hyg 1976; 25 : 146150.

16.

Kuberski TT, Rosen L.. A simple techn

antigen in mosq