hasil penelitian_final.indd

312

cdk vol. 34 no. 6/159 Nov - Des 2007

Regulasi Siklus Sel: Kunci Sukses

Somatic Cell Nuclear Transfer

Ibssz!Nvsuj

2-3

-!!Bsjfg!Cpfejpop

!Cpfokbnjo!Tfujbxbo

!Gfssz!Tboesb

Ejwjtjpo!pg!Tufn!Dfmm-!Tufn!Dfmm!boe!Dbodfs!Jotujuvuf-!Kblbsub!24321-!Joepoftjb/

Mbcpsbupsz!pg!Fncszpmphz-!Gbdvmuz!pg!Wfufsjobsz!Nfejdjof-!Cphps!Bhsjdvmuvsbm!Vojwfstjuz-!Cphps!27791-!Joepoftjb/

ABSTRAK

Kebanyakan sel saat fase embrionik relatif berada pada kondisi membelah maupun persiapan untuk melakukan pembela-

han. Serangkaian proses yang meliputi penggandaan materi genetik (DNA) serta komponen sel lainnya, pembelahan inti

(karyokinesis), dan pembelahan sitoplasma (sitokinesis) disebut dengan siklus sel. Pemahaman terhadap regulasi siklus

sel merupakan poin penting dalam manipulasi dan rekayasa sel oosit maupun embrio, khususnya pada SCNT. Prinsip

transfer inti berkaitan erat dengan interaksi sitoplasma,

nuclear reprogramming

, dan efek siklus sel. Mayoritas proses

dalam siklus sel dikendalikan oleh interaksi protein

cyclin-dependent kinases

(Cdks). MPF telah diidentifi kasi sebagai

kompleks cyclin dan Cdk. Aktivitas MPF relatif tinggi saat sel oosit berada pada metafase II. Aktivitas MPF yang tinggi

saat dilakukan transfer inti dapat menyebabkan NEBD, PCC, dan reorganisasi sitoskleton. Mekanisme regulasi siklus

sel serta efek siklus sel donor dan resipien akan dibahas dalam artikel ini.

Kata Kunci: Siklus Sel, Transfer Inti Sel Somatis, MPF, cyclin, Cdk

Korespondensi:

Harry Murti. Division of Stem Cell, Stem Cell and Cancer Institute. Jl. Ahmad Yani No.2 (Bintang Toedjoe), Pulomas,

Jakarta 13210, Indonesia. hmurty@sci-indonesia.org

QFOEBIVMVBO

Siklus sel pada sel eukaryotik merupakan suatu taha-

pan kompleks meliputi penggandaan materi genetik, pe-

ngaturan waktu pembelahan sel, dan interaksi antara

protein dan enzim

. Siklus sel pada sel eukaryotik dapat

dibagi menjadi 4 tahap, yaitu: G

(

Gap

1), S (Sintesis),

(

Gap

2), dan M (Mitosis)

1,2

. Tahap G1 merupakan se-

lang antara tahapan M dengan S. Pada tahap ini sel terus

tumbuh dan melakukan persiapan untuk sintesis DNA. Sel

akan melakukan sintesis DNA dan terjadi proses replikasi

kromosom pada saat berada di tahap S

3,4

. Pada tahap G

sel yang telah mereplikasi kromosom akan menduplikasi

keseluruhan komponen seluler lainnya. Selain itu terjadi

pula sintesis mRNA dan beberapa protein tertentu

Secara umum tahap G

, G

, S, dan G

disebut juga se-

bagai tahap interfase

. Sedangkan pembelahan sel atau

sering disebut dengan tahap mitosis, terdiri dari empat

subtahapan, yaitu profase, metafase, anafase, dan telo-

fase

. Pada kondisi tertentu, sel-sel yang tidak mem-

belah, karena tidak berdiferensiasi, meninggalkan tahap

dan pindah ke dalam tahap G

. Sel-sel yang berada

dalam tahap G

sering disebut sedang beristirahat/ diam

(

quiescent

SFHVMBTJ!TJLMVT!TFM

Pada proses perkembangan sel dikenal beberapa tipe

siklus sel yaitu siklus sel embrionik, siklus sel somatis,

siklus endoreduplikasi, dan siklus sel miosis

. Masing-

masing tipe siklus sel mempunyai komponen protein dan

enzim yang berbeda dalam regulasi siklus sel. Dalam

artikel ini hanya akan dibahas regulasi pada siklus sel

embrionik dan sel somatis.

b/!!Qspufjo-!Fo{jn-!ebo!

Joijcjups

Enzim yang berperan secara dominan dalam regulasi sik-

lus pembelahan sel adalah MPF (

Maturation/ Meiosis/

Mitosis-Promoting Factor

)

, APC (

Anaphase-Promoting

Complex

)

dan CSF (

Cytostatic Factor

)

. Masing-masing

enzim mempunyai komponen protein dan

inhibitor

yang

spesifi k pada setiap tahap siklus pembelahan sel.

MPF merupakan suatu enzim heterodimer yang terdiri

dari p34

cdc2

sebagai suatu subunit katalitik dan cyclins

sebagai suatu subunit regulatorik. Cdk (

Cyclin depen-

dent kinase

) adalah nama lain dari p34

cdc2

; 34kDa. cdc2

merupakan gen siklus pembelahan sel yang mengkode

enzim Cdk pada siklus sel mamalia

6,10,11

. Cdk merupakan

protein kinase yang aktivitasnya diregulasi oleh keadaan

terfosforilasi pada saat berikatan dengan

cyclin

. Selama

siklus pembelahan sel, jumlah Cdk relatif sama, namun

jumlah

cyclin

bervariasi pada tiap tahapan

Pada keadaan

in vitro

, Cdk dapat memfosforilasi sejum-

lah protein yaitu

histone

H1,

nuclear lamins

, RNA

poly-

merase

II, p60src, antigen T, dan faktor elongasi

. Fos-

forilasi

histone

secara

in vitro

telah digunakan sebagai

dasar dalam teknik biokimia pada penentuan dan pengu-

kuran aktivitas enzim Cdk

. Pada keadaan

in vivo

, akti-

cdk vol. 34 no. 6/159 Nov - Des 2007

313

Hbncbs!2/!Nflbojtnf!sfhvmbtj!tjlmvt!tfm!qbeb!ubibq!H

-!H

-!ebo!T.

Pada tahap G

sinyal faktor pertumbuhan ekstra seluler akan menginduksi

cyclin D, CDI, dan Cyclin E. Pada tahap G

serangkaian reaksi biokimia akan

membuat Rb terfosforilasi sehingga faktor transkripsi E2F terlepas dan aktif

menstimulasi sintesis protein tahap S.

Kedua CDI ini berikatan dengan

cyclin

D-Cdk4 tapi tidak

menghambat aktivitas kinasenya dan hasil penelitian

menunjukkan bahwa p21

cip1

dan p27

kip1

justru dibutuh-

kan untuk pembentukan dan impor

cyclin

D-Cdk4 oleh

inti. Kedua CDI tersebut efektif menghambat aktivitas cy-

clin E-Cdk2. Dengan demikian keberadaan protein CDI di

tahap G

adalah untuk memacu pembentukan kompleks

aktif

cyclin

D-Cdk4 dan pada saat bersamaan menunda/

menghambat aktivasi dari kompleks cyclin E-Cdk2

Protein Rb merupakan penghambat transkripsi, karena

keberadaannya menonaktifkan E2F yang berperan se-

bagai faktor transkripsi

. Setelah protein yang diperlukan

dalam tahap S dihasilkan dari transkripsi, maka

cyclin

D-Cdk4,

cyclin

D-Cdk6, dan

cyclin

E-Cdk2 akan bersama-

sama memfosforilasi protein Rb, p107 dan p130 men-

jadi tidak aktif sama sekali. Hal ini akan mengaktifkan

secara penuh proses transkripsi pada tahap S

. Den-

gan demikian sel tersebut telah memasuki tahap S pada

siklus sel. Pada sel mamalia jenis Cdk dan

cyclin

yang

ditemukan pada masa transisi tahap G

/S adalah Cdk2

(p33), Cdk4, Cdk6, serta

cyclin

A, D1, D2, D3, dan E

Pada tahap S, kompleks

cyclin

E-Cdk2 berperan mengini-

siasi replikasi DNA. Selain itu

cyclin

A-Cdk2 juga berpe-

ran dalam menginisiasi replikasi DNA secara lengkap dan

meningkatkan ekspresi histon dan beberapa gen/protein

yang akan dibutuhkan saat replikasi

Pada tahap G

, terjadi peningkatan sintesis

cyclin

B yang

akan mencapai tingkat konsentrasi maksimal pada saat

tahap M

. Pada sel mamalia jenis Cdk dan

cyclin

yang

ditemukan pada masa transisi tahap G

/M adalah Cdk1

(Cdc2) serta

cyclin

A, B1, dan B2

. Setelah tumbuh

dan menduplikasi komponen sel, maka sel akan melaku-

kan pembelahan menjadi dua sel anakan yang terjadi

pada tahap M.

Pada tahap M (profase, metafase, anafase, dan telofase),

defosforilasi dan aktivasi

cyclin

B-Cdk1 berpengaruh ter-

vasi Cdk akan memacu sel masuk ke dalam tahap M dan

menyebabkan pecahnya membran inti (NEBD=

Nuclear

Envelope Breakdown

)

, kromosom mengalami konden-

sasi16, penyusunan kembali sitoskeleton

, dan dup-

likasi

centrosome

. Aktivitas Cdk dikontrol oleh asosiasi

dengan cyclin, sintesis dan proteolisis oleh Cdk sendiri,

modifi kasi posttranslasi, dan interaksi dengan sejumlah

inhibitor

kinase alami (CDI=

Cyclin-dependent kinase In-

hibitor

). Faktor cekaman luar yang tinggi akan meningkat-

kan ekspresi CDI dan menyebabkan siklus sel terganggu/

terhenti

. Secara garis besar ada 2 golongan CDI, yaitu:

golongan Ink4 (p15, p16, p18, p19) dan golongan Cip/

Kip (p21

cip1

, p27

kip1

, p57

kip2

)

APC merupakan suatu

multi-subunit

ubiquitin ligase

yang berperan dalam regulasi transisi pada siklus sel.

APC tersusun oleh protein yang berasosiasi salah satu

atau kedua aktivatornya yaitu: Cdc20 dan Cdh1, untuk

mengarahkan

polyubiquitylation

pada

securin, cyclin

, dan

regulator siklus sel lain yang akan didegradasi oleh pro-

teasome. Cdc20 merupakan substrat target pada awal

mitosis, sedangkan Cdh1 merupakan substrat target

pada akhir mitosis dan selama memasuki tahap G

c/!!Nflbojtnf!Sfhvmbtj

Pada umumnya sel-sel eukaryotik yang telah menyele-

saikan pembelahan pada tahap M akan masuk ke dalam

tahap G

untuk kembali melakukan pembelahan atau ma-

suk ke dalam tahap G

untuk beristirahat/ diam

. Sel

dapat keluar dari tahap G

dan masuk ke dalam tahap G

apabila berada dalam suatu kondisi tanpa faktor pertum-

buhan. Sel-sel yang dikultur pada medium sedikit kadar

serum tetap akan melakukan siklus sel G

-S-G

-M, na-

mun setelah keluar dari tahap M akan langsung masuk

ke tahap G

. Penambahan serum atau faktor pertumbu-

han akan menginduksi sel untuk masuk kembali ke siklus

sel sampai ke titik restriksi untuk proses berikutnya

Setelah melewati titik restriksi (protein Rb terfosfo-

rilasi), regulasi siklus sel tidak bergantung pada sinyal

ekstraselular

21,23

Sel yang berada di tahap G

yang distimulus dengan fak-

tor pertumbuhan untuk masuk ke dalam G

, pada awal-

nya akan mengekspresikan

cyclin

D. Kemudian

cyclin

akan berikatan dengan Cdk4 dan Cdk6. Kompleks Cdk-

cyclin

tersebut lalu masuk ke dalam inti dan akan mem-

fosforilasi protein

Retinobla-stoma

(Rb), protein p107

dan p130. Fosforilasi terhadap Rb diikuti oleh aktivasi

faktor transkripsi famili E2F dan memicu transkripsi pro-

tein yang diperlukan pada tahap G

dan S. Sinyal mito-

genik yang menginduksi terbentuknya

cyclin

D, juga akan

menginduksi terbentuknya

cyclin

E dan dua CDI yaitu:

p21

cip1

dan p27

kip1

Regulasi Siklus Sel

314

cdk vol. 34 no. 6/159 Nov - Des 2007

(4n) karena telah mengalami replikasi DNA pada tahap S,

maka tahap S mempunyai jumlah kromosom yang berva-

riasi antara diploid-tetraploid (2n-4n). Penelitian kloning

pada mamalia menggunakan teknik SCNT menunjukkan

keberhasilan ketika menggunakan inti donor sel somatis

pada tahap G0

31,32,33,34,35

, tahap G1

35,36,37

, tahap G2

36,38

, tahap M pada metafase

36,39,40,41

Hbncbs!3/!Tjlmvt!tfm!pptju!qbeb!tbbu!nfubgbtf!JJ.

Aktivitas MPF berada pada level tertinggi pada saat profase dan metafase.

Sebagian besar sel oosit mamalia diovulasikan pada saat metafase II. Sel oosit

matang mempunyai sepasang kromosom haploid dan sebuah

polar body I yang

diploid. Aktivitas CSF menyebabkan sel oosit dapat stabil berada pada kondisi

ini. Setelah sel oosit difertilisasi (diaktifasi) maka CSF akan terdegradasi dan

aktivitas APC menjadi meningkat serta aktivitas MPF menurun drastis.

c/!!Tjlmvt!Tfm!Pptju!Tfcbhbj!Sftj qjfo

Perbedaan kandungan protein yang terekspresi pada tiap

tahap siklus sel, menjadi faktor penentu untuk mempro-

gram kembali inti sel donor

. Sel oosit yang telah me-

ngalami ovulasi biasanya berada pada metafase meiosis

II (MII). Pada tahap tersebut konsentrasi MPF (cyclin

B-Cdk1) mencapai tingkatan maksimal

. Selain itu CSF

juga memegang kendali regulasi siklus sel dengan mem-

pertahankan kondisi stabil pada MII dan menghambat

masuk ke tahap anafase

. Penggunaan sel oosit pada

tahap MII sebagai resipien SCNT telah berhasil pada

kloning mencit

31,32,34

, babi

, domba

, ferret

37,39

, dan

kambing

Konsentrasi MPF sitoplasma sel oosit pada tahap MII

juga dipengaruhi oleh aktivasi

. Setelah sel oosit diak-

tivasi baik secara elektrik

maupun secara kimiawi de-

ngan SrCl2

47,48

maka konsentrasi MPF akan menurun

secara drastis.

EJTLVTJ!

b/!!Tjolspojtbtj!Tjlmvt!Tfm!

Dalam satu siklus sel secara normal, materi genetik

(DNA) hanya mengalami satu kali replikasi dan mitosis.

Hingga saat ini belum diketahui secara jelas mekanisme

yang mendasari hal tersebut

. Namun beberapa hasil

penelitian, menunjukkan bahwa diduga membran inti

mempunyai andil dalam terjadinya replikasi DNA

. Pada

transfer inti dengan resipien pada tahap MII, konsentrasi

MPF yang tinggi dapat menyebabkan inti donor mengala-

mi NEBD dan PCC (

Premature Chromosome Condensa-

tion

)

. Hasil penelitian menunjukkan bahwa semua inti

sel pada semua tahap siklus sel akan mengalami NEBD

hadap perubahan morfologi selama mitosis berlangsung.

Substrat dari

cyclin

B-Cdk1 adalah

nuclear lamins

, pro-

tein

nucleolar

, protein

centrosomal

, dan Eg5. Pada sub-

tahap profase metafase, konsentrasi MPF berada pada

level tertinggi dan akan mengalami penurunan pada sub

tahap berikutnya.

Sebelum memasuki subtahap berikutnya (anafase), sel

oosit yang telah mencapai metafase pada meiosis II

(MII), akan tertahan pada kondisi tersebut karena pe-

ngaruh CSF. Komponen utama CSF adalah golongan Emi

yaitu Emi1 (

Early Mitotic Inhibition 1

) dan Emi2

. Apabila

terjadi fertilisasi atau partenogenesis, masuknya sperma

akan mengaktivasi Ca

calmo-dulin-dependent protein

kinase

II (CaMKII) dalam sitoplasma. CaMKII akan mem-

fosforilasi protein yang mengekspresikan CSF, sehingga

ekspresi CSF terhambat. Selain itu CSF juga akan ter-

degradasi oleh sistem ubiquitin/

proteosome

. CSF yang

mengalami degradasi menyebabkan APC dapat berperan

aktif, sehingga sel oosit keluar dari tahap metafase dan

masuk ke dalam anafase

APC berperan sangat dominan pada tahap anafase. Salah

satu peranan APC adalah menghancurkan

cyclin

A dan

cyclin

B yang mengaktifkan MPF, sehingga konsentrasi

MPF akan turun drastis seiring selesainya tahap M

4/!!Ivcvohbo!Tjlmvt!Tfm!ebo!TDOU

Aplikasi SNCT (

Somatic Cell Nuclear Transfer

) dalam bi-

dang biomedis adalah sebagai salah satu teknik alternatif

untuk memproduksi ntESC (

nuclear transfer Embryonic

Stem Cell

)

. Transplantasi ntESC yang bersifat

autolo-

gous

diharapkan mampu mengatasi masalah penolakan

sistem imun pada penderita

. Konsep

therapeutic clo-

ning

ini dikembangkan untuk mengatasi berbagai je-

nis penyakit degeneratif

. Teknik SCNT pada dasarnya

meliputi enukleasi (pengeluaran inti sel oosit resipien),

transfer inti (inti sel somatis dimasukkan ke dalam si-

toplasma sel oosit resipien), dan aktivasi (menginduksi

sel oosit hasil rekontruksi untuk mengalami

nuclear re-

programming

dan berkembang seperti sel embrio yang

normal)

13,27

. Keberhasilan

nuclear reprogramming

pada

SCNT sangat dipengaruhi oleh sinkronisasi tahapan siklus

sel antara sel somatis sebagai donor inti dan sel oosit

sebagai resipien

. Hal ini menjadi faktor penting karena

interaksi antara inti sel somatis dengan sitoplasma sel

oosit merupakan kunci sukses pada awal perkembangan

embrionik

b/!!Tjlmvt!Tfm!Tpnbujt!Tfcbhbj!Epops!Jouj

Pada teknik transfer inti, salah satu faktor yang harus di-

perhatikan dari sel donor inti adalah jumlah kromosom

Sel somatis pada tahap G

mempunyai kromosom

diploid (2n), tahap G

mempunyai kromosom tetraploid

Regulasi Siklus Sel

cdk vol. 34 no. 6/159 Nov - Des 2007

315

dan PCC bila ditansfer ke sitoplasma sel oosit yang kon-

sentrasi MPFnya tinggi

. Namun bagaimana efek NEBD

dan PCC terhadap proses

nuclear reprogramming

belum

diketahui secara tuntas hingga saat ini

Inti donor pada tahap G

dan G

yang masing-masing

jumlah kromosomnya diploid (2n) bila ditransfer ke dalam

sel oosit resipien pada MII akan terjadi PCC pada kro-

matid tunggal, lalu mengalami

Nuclear Reformation

(2n)

dan akan terjadi replikasi DNA (menjadi 4n) kemudian

akan membelah menjadi dua sel dengan masing-masing

kromosom diploid

Inti donor pada tahap G

yang jumlah kromosomnya te-

traploid (4n) bila ditransfer ke dalam sel oosit resipien

pada MII akan terjadi PCC pada kromatid ganda, lalu

mengalami

Nuclear Reformation

(4n) dan akan terjadi

replikasi DNA (menjadi 8n) kemudian akan membelah

menjadi dua sel dengan masing-masing kromosom te-

traploid (4n). Hal ini menunjukkan bahwa inti donor tahap

tidak sinkron apabila ditransfer pada tahap MII sel

oosit resipien

Pada transfer inti ke dalam sel oosit dengan MPF ren-

dah yang dapat diperoleh dengan aktivasi secara cepat,

menunjukkan bahwa inti donor sel tahap G

, G

, dan

S akan tetap mengalami replikasi DNA, sehingga sel

anakan mempunyai kromosom diploid (2n). Sedangkan

inti donor tahap G

tidak melakukan replikasi DNA, se-

hingga pada kromosom sel anakannya tetap 2n. Hal ini

juga memperkuat dugaan bahwa faktor yang mempenga-

ruhi replikasi DNA bukan sekedar karena membran inti

yang pecah dan terjadi kondensasi prematur (PCC), tapi

diduga juga disebabkan oleh kandungan DNA (kromosom)

pada inti donor

Ada beberapa cara untuk memperoleh kultur sel soma-

tis pada tahap-tahap tertentu dalam siklus sel. Untuk

memperoleh sel pada tahap G

, dapat dilakukan de-

ngan cara mengkultur sel dengan medium tanpa/rendah

serum

. Sinkronisasi tahap G

dapat dilakukan dengan

cara menambahkan cycloheximide pada medium kultur

Sedangkan tahap M pada metafase dapat diperoleh de-

ngan menambahkan demecolcine

atau nocodazole

(senyawa penghambat polimerisasi mikrotubuli) pada

medium kultur.

c/!!!Qfslfncbohbo!Fncsjp!Qbtdb!Bqmjlbtj!TDOU

Keberhasilan perkembangan dan pertumbuhan embrio

hasil SCNT cenderung menurun seiring dengan mening-

katnya jumlah pembelahan sel

50,51

. Jumlah embrio yang

berhasil bertahan dan hidup pada tahap embrio 2 sel

relatif lebih banyak daripada tahapan berikutnya, yaitu 4

sel, 8 sel, morula, dan blastula

. Beberapa penelitian

menggunakan parameter keberhasilan perkembangan

kultur embrio hingga mencapai tahap blastosis sebagai

salah satu tolok ukur keberhasilan SCNT dan

nuclear

reprogramming

. Sel embrio hasil SCNT yang berhasil

mencapai tahap blastosis dapat digunakan untuk keperlu-

an kloning reproduksi (diimplantasi ke hewan betina) dan

produksi

embryonic stem cell

(ntESC) dimana ICM diiso-

lasi dan dikultur dalam keadaan belum berdiferensiasi

Hasil penelitian menunjukkan bahwa ntESC mempunyai

sifat pluripoten dan dapat berdiferensiasi menjadi ber-

bagai macam sel, seperti

dopaminergic & seronergic

neuron

dan

germ cells

. Namun ntESC masih berpo-

tensi memiliki beberapa karakter yang berbeda dengan

ESC alami (hasil fertilisasi). Hal ini diduga dipengaruhi

oleh memori epigenetik yang tidak sepenuhnya dapat di-

hapus dalam proses nuclear reprogramming

TJNQVMBO

Jumlah kromosom dalam inti sel donor dan kandungan

MPF dalam sitoplasma sel oosit menentukan terjadinya

replikasi DNA. Sel oosit pada tahap MII merupakan re-

sipien bagi inti sel donor yang dapat memfasilitasi ter-

jadinya proses nuclear reprogramming. Aktivasi sel oosit

dapat menurunkan konsentrasi MPF secara drastis. Inti

sel donor pada berbagai tahap siklus sel mempunyai jum-

lah kromosom yang berbeda, sehingga perlu dilakukan

sinkronisasi sebelum melakukan transfer inti. Sinkronisa-

si tahapan sel donor dapat dilakukan dengan mengkultur

sel tanpa serum atau penambahan berbagai senyawa

kimia pada medium kultur. Pemahaman tentang regulasi

siklus sel oosit sebagai resipien dan sel somatis sebagai

inti donor merupakan faktor penting dalam keberhasilan

SCNT. Dengan demikian dapat diperoleh sumber ntESC

yang berpotensi tinggi untuk therapeutic cloning.

EBGUBS!QVTUBLB

1. Campbell MK, Farrell SO. Biochemistry. 4th ed. UK, London: Thomson

Learning Inc., 2003; Hal 272-3.

2. Johnson DG, Walker CL. Cyclins and cell cycle checkpoints. Ann Rev Phar-

macol Toxicol. 1999; 39: 295-312.

3. Rang HP, Dale MM, Ritter JM, Moore PK. Pharmacology. 5th ed. UK,

London: Churchill Livingstone, 2003; Hal 69-73.

4. Doree M, Hunt T. From Cdc2 to Cdk1: When did the cell kinase joint its

partner?. Cell Sci. 2002; 115: 2461-4.

5. Tyson JJ, Czikasz-Nagy A, Novak B. The dynamics of cell cycle regulation.

BioEssays. 2002; 24: 1095-109.

6. Koolman J, Rohm KH. Atlas berwarna dan teks biokimia. Alih bahasa:

Septelia Inawati. Jakarta: Penerbit Hipokrates, 2001; Hal 352-3.

7. Van den Heuvel S. Cell-cycle regulation. The C. elegans Research Com-

munity, WormBook, http://www.wormbook.org. 2005; doi/10.1895/

wormbook.1.28.1.

8. Campbell KHS, Loi P, Otaegui PJ, Wilmut I. Cell cycle co-ordination in

embryo cloning by nuclear transfer. Reprod Fert. 1996; 1: 40-6.

9. Schmidt A, Rauh NR, Nigg EA, Mayer TU. Cytostatic factor: an activity that

puts the cell cycle on hold. Cell Sci. 2006; 119: 1213-8.

10. Gilbert SF. Developmental Biology. 7th ed. Massachusetts, Sunderland:

Sinauer Associates Inc., 2003; Hal 222.

11. Gupta PK. Key regulators of cell cycle: 2001 nobel prize for physiology or

medicine. Current Science. 2001; 81: 1280-87.

Regulasi Siklus Sel

316

cdk vol. 34 no. 6/159 Nov - Des 2007

12. Sherr CJ, Robets JM. Living with or without cyclins and cyclin-dependant

kinases. Gene Dev. 2004; 18: 2699-711.

13. Campbell KHS, Ritchie WA, Wilmut I. Nuclear-cytoplasmic interactions

during the fi rst cell of nuclear transfer reconstructed bovine embryos: im-

plications for deoxyribonucleic acid and development. Biol Reprod. 1993;

49: 933-42.

14. Loog M, Morgan DO. Cyclin specifi ty in the phosphorylation of cyclin-de-

pendent kinase substrates. Nature. 2005; 434: 104-8.

15. Kawahara M, Wakai T, Yamanaka KI, et al. Caffeine promotes premature

chromosome condensation formation and in vitro development in porcine

reconstructed embryos via a high level of maturation promoting factor

activity during nuclear transfer. Reprod. 2005; 130: 351-7.

16. El Achkar E, Gerbault-Seureau M, Muleris M, Dutrillaux B, Debatisse M.

Premature condensation induces break at the interface of early and late

replicating chromosome bands bearing common fragile sites. Proc Natl

Acad Sci USA. 2005; 102: 18069-74.

17. Pines J. Cyclins and cyclin-dependent kinases: a biochemical review.Bio-

chem. 1995; 308: 697-711.

18. Lacey KR, Jackson PK, Stearns T. Cyclin-dependent kinase control of cen-

trosome duplication. Proc Natl Acad Sci USA. 1999; 96: 2817-22.

19. Crews CM, Shotwell JB. Small-molecule inhibitors of the cell cycle: an

overview. Progress in cell cycle research. 2003; 5: 125-33.

20. Qu Z, MacLellan WR, Weiss JN. Dynamics of the cell cycle: checkpoints,

sizers, and timers. Biophysical. 2003; 85: 3600-11.

21. Hartwell LH, Weinert TA. Checkpoints: controls that ensure the order of

cell cycle events. Science. 1989; 246: 629-34.

22. Jones SM, Kazlauskas A. Growth factor-dependent signaling and cell cycle

progression. Federation of European Biochemical Societies. 2001; 490:

110-6.

23. McGowan CH. Regulation of the eukaryotic cell cycle. Progress in Cell

Cycle Research. 2003; 5: 1-4.

24. Gurdon JB, Colman, A. The future of cloning. Nature 1999; 402: 743-6.

25. Cibelli JB, Kiessling AA, Cunniff K, Richards C, Lanza RP, West MD.

Somatic cell nuclear transfer in humans: pronuclear and early embryonic

development. Regenerative Med. 2001; 2: 25-31.

26. Hipp J, Atala A. Tissue engineering, stem cells, cloning, and parthenogenesis:

new paradigms for therapy. Exp Clin Assist Reprod. 2004; I:3.

27. McLaren A. Cloning: pathway to a pluripotent future. Science. 2000; 288:

1775-80.

28. Stice SL, Robl JM, Ponce de Leon FA, Jerry J, Golueke PG, Cibelli JB,

Kane JJ. Cloning: new breakthroughs leading to commercial opportunities.

Theriogenology. 1998: 49: 129-38.

29. Colman A. Somatic cell nuclear transfer in mammals: progress and ap-

plications. Clon. 2000; 1: 185-200.

30. Kato Y, Tsunoda Y. Totipotency and pluripotency of embryonic nuclei in the

mouse. Mol Reprod Dev. 1993; 36: 276-8.

31. Wakayama T, Yanagimachi R. Mouse cloning with nucleus donor cells of

different age and type. Mol Reprod Dev. 2001; 58: 376-83.

32. Wakayama T, Perry ACF, Zuccotti M, Johnson KR, Yanagimachi R. Full-

term development of mice from enucleated oocytes injected with cumulus

cell nuclei. Nature. 1998; 394: 369-74.

33. McCreath KJ, Howcroft J, Campbell KHS, Colman A, Schnieke AE, Kind

AJ. Production of gene-targeted sheep by nuclear transfer from cultured

somatic cells. Nature 2000; 405: 1066-9.

34. Wakayama T, Yanagimachi R. Cloning of male mice from adult tail-tip cells.

Nature Gen. 1999; 22: 127-8.

35. Tomii R, Kurome M, Ochiai T, et al. Production of cloned pig by nuclear

transfer of preadipocytes established from adult mature adipocytes.

Cloning Stem Cell 2005; 7: 279-88.

36. Tian XC, Kubota C, Enright B, Yang X. Cloning animals by somatic cell

nuclear transfer-biological factors. Reprod Biol Endocr. 2003; I:98.

37. Li Z, Sabet MR, Zhou Q, et al. Developmental capacity of ferret embryos

by nuclear transfer using G0/G1-phase fetal fi broblast. Biol Reprod. 2003;

68: 2297-303.

38. Wilmut I, Beaujean N, de Sousa PA, et al. Somatic cell nuclear transfer.

Nature 2002; 419: 583-6.

39. Li Z, Chen X, Sun X, et al. Nuclear transfer of M-phase ferret fi broblasts

synchronized with the microtubule inhibitor demecolcine. Experimental

Zoology. 2005; 303: 1126-34.

40. Wakayama T, Rodriguez I, Perry ACF, Yanagimachi R, Mombaerts P. Mice

cloned from embryonic stem cells. Proc Natl Acad Sci USA. 1999; 96:

14984-89.

41. Ono Y, Scimozawa N, Muguruma K, et al. Production of cloned mice from

embryonic stem cells arrested at metaphase. Reprod. 2001; 122: 731-6.

42. Dinnyes A, Szmolenszky A. Animal cloning by nuclear transfer: state-of-

the-art and future perspectives. Acta Biochimica Polonica. 2005; 52: 585-8.

43. Mohamed Nour MS, Ikeda K, Takahashi Y. Bovine nuclear transfer using

cumulus cells derived from serum-starved and confl uent cultures. Reprod

Dev. 2000; 46: 85-92.

44. Baguisi A, Behboodi E, Melican DT, et al. Production of goats by somatic cell

nuclear transfer. Nature Biotech. 1999; 17: 456-61.

45. Wakayama T, Yanagimachi R. Effect of cytokinesis inhibitors, DMSO and the

timing of oocyte activation on mouse cloning using cumulus cell nuclei. Re-

prod. 2001; 122: 49-60.

46. Bing Y, Che L, Hirao Y, Takenouchi N, Nagai T. Development of porcine em-

bryos reconstructed by nuclear transfer of culutured cumulus cells into in

vitro maturated and enucleated oocytes. Reprod Dev. 2000; 46: 375-9.

47. Kato M, Hirabayashi M, Aoto T, Ito K, Ueda M, Hochi S. Strontium-induced

activation regimen for rat oocytes in somatic cell nuclear transplantation.

Reprod Dev. 2001; 47: 407-13.

48. Tomashov-Matar R, Tchetchik D, Eldar A, Kaplan-Kraicer R, Oron Y, Shalgi R.

Strontium-induced rat egg activation. Reprod. 2005; 130: 467-74.

49. Sung LY, Shen P, Jeong BS, et al. Premature chromosome condensation is

not essential for nuclear reprogramming in bovine somatic nuclear trans-

fer. Biol Reprod. 2006; DOI:10.1095/biolreprod.106.053561.

50. McEvoy TG, Robinson JJ, Sinclair KD. Developmental consequences of

embryo and cell manipulation in mice and farm animals. Reprod. 2001;

122: 507-18.

51. Liu SZ, Yao LJ, Jiang MX, et al. Apoptosis in rabbit embryos produced by

fertilization or nuclear transfer with fi broblast and cumulus cells. Reprod.

2005; 130: 359-66.

52. Ng SC, Chen N, Yip WY, et al. The fi rst cell cycle after transfer of somatic

cell nuclei in a non-human primate. Dev. 2004; 131: 2475-84.

53. Wakayama T, Tabar V, Rodriguez I, Perry ACF, Studer L, Mombaerts P.

Differentiation of embryonic stem cell lines generated from adult somatic

cells by nuclear transfer. Science. 2001; 292: 740-3.

54. Ng RK, Gurdon JB. Epigenetic memory of active gene transcription is

inherited through somatic cell nuclear transfer. Proc Natl Acad Sci USA.

2005;102:1957-62.