Cermin Dunia Kedokteran

HASIL PENELITIAN

Uji Bioaktivitas Sari Etanol

Beberapa Tanaman Terhadap Sel

Lekemia L1210

Ermin Katrin W.

Pusat Aplikasi Isotop dan Radiasi, Badan Tenaga Atom Nasional, Jakarta.

ABSTRAK

Uji bioaktivitas sari etanol dan tusuk konde (Heliotropium indicum L.), talatak

manuk (Dysoxylum excelsum B 1), belimbing wuluh (Averrhoa bilimbi L.), dadap srep

(Erythrina hypophorus Boerl.), pacar cina (Aglaia odorata Lour), benalu masisien, dan

lekemia L1210. Hasil pengujian

m, tanaman tersebut mempunyai aktivitas

. Pemumian lebih lanjut terhadap sari daun

artridge dilanjukan dengan KCKT diperoleh

i A, B, C, D, E, F, dan G. Ke tujuh fraksi

buhan sel lekemia L1210 dengan 1C 6,8

h fraksi tersebut sedang dilakukan.

PENDAHULUAN

Lekemia atau lebih dikenal dengan nama kanker darah adalah

suat

yaitu faktor intrinsik (host): keturunan, kelainan kromosom,

defisiensi imun, disfungsi sumsum tulang; dan faktor ekstrinsik

(lingkungan) : paparan radiasi, bahan kimia obat-obatan, dan

infeksi

(3)

Dalam dekade terakhir ini, usaha untuk menanggulangi

penyakit tersebut melalui penggalian obat tradisional telah banyak

dilakukan, sehingga memberikan harapan pada penderita untuk

bertahan hidup. Lebih dari 275.000 jenis ekstrak bahan alam

telah diuji oleh National Cancer Institute (NCI) Amerika Serikat

dalam program skrining zat anti kanker yang dimulai sejak tahun

1955

(4)

, dan hingga tahun 1960-an telah diperoleh sekitar 1.770

uga telah berhasil

men

Indonesia merupakan negara yang kaya berbagai jenis

tanaman dan di antaranya banyak digunakan sebagai obat secara

tradisional. Biasanya obat dan tanaman tersebut digunakan dalam

bentuk jamu. Pada umumnya khasiat tanaman obat tersebut belum

dibuktikan kebenarannya secara ilmiah. Dalam program

pembinaan penggunaan tanaman obat tradisional, Departemen

Kesehatan menganjurkan agar dilakukan penelitian ilmiah

tentang khasiat tanaman obat tradisional

(7)

Benalu teh dan berbagai jenis benalu lainnya telah dikenal

masyarakat sebagai obat kanker; sementara obat-obat kimia

untuk mengobati kanker (secara chemotherapy) dewasa

u penyakit yang tidak banyak dijumpai, tetapi umumnya

berakhir dengan kematian. Meskipun kematian akibat lekemia

relatif kecil dibandingkan dengan kematian akibat penyakit

lainnya tetapi berdasarkan laporan WHO, kematian akibat

lekemia meningkat di berbagai negara,selama 30 tahun terakhir

ini angka kematian di Amerika Serikat meningkat 2 kali lipat

sejaktahun 1971

(2)

. Penyakit lekemia disebabkan oleh 2 faktor,

sari etanol berbagai jenis tanaman yang dapat digunakan untuk

mengobati lekemia

(2)

Program skrining tersebut sangat giat dilakukan setelah

ditemukan Vinkristine (obat lekemia) dan Vinblastine (obat

kanker payudara dan penyakit Hodgkin) dan daun tapak dara.

(Cataranthus roseus)

(5)

. Fujimoto et at.

(6)

gisolasi 3 jenis zat, yaitu Blumealactone A, B, dan C dan

tanaman sembung (Blumea balsamifera) yang dapat

menghambat pertumbuhan sel Yoshida sarcoma.

kenanga hitam telah dilakukan terhadap sel

menunjukkan bahwa kecuali kenanga hita

sebagai anti lekemia dengan 1C 31 ppm

tusuk konde dengan menggunakan sep-pak c

tujuh fraksi yang belum murni, yaitu fraks

tersebut semuanya aktif menghambat pertum

ppm. Pemurnian lebih lanjut terhadap ke tuju

Cermin Dunia Kedokteran No. 120, 1997 41

ini umumnya berasal dari luar negeri dan harganya sangat

mahal. sehingga sulit terjangkau oleh masyarakat umun yang

membutuhkan.

Berdasarkan kenyataan tersebut, maka dicoba melakukan uji

bioaktivitas sari etanol dan beberapa jenis tanaman terhadap sel

lekemia L1210. Beberapa jenis tanaman yang diuji adalah tusuk

konde (Heliotropium indicum L.), talatak manuk (Dysoxylum

excelsum BI.), belimbing wuluh (Averrhoa bilimbi L.), dadap

srep (Erythrina hypophorus Boerl.), pacar cina (Aglaia odorata

Lour), benalu mesisien, dan kenanga hitam. Tanaman-tanaman

ini secara tradisional digunakan oleh masyarakat untuk mengobati

berbagai penyakit. Misalnya tusuk konde untuk mengobati infeksi

paru, sariawan, desentri, peradangan buah zakar, bisul, peluruh

haid, dan lain-lain. Dutta et al.(8) melaporkan bahwa tusuk konde

mengandung alkoloid pirolizidmn yaitu indisin-N-oksida yang

dapat memberikan efek penyembuhan terhadap pasien lekemia

akut.,

Diharapkan, dan pengujian tersebut dapat diperoleh sari

yang aktif menghambat pertumbuhan sel lekemia L1210,

sehingga dapat digunakan untuk mengobati penyakit lekemia.

Lebih lanjut dapat diisolasi untuk mendapatkan senyawa murni

untuk tujuan identifikasi struktur kiamianya.

BAHAN DAN METODE

Ekstraksi Tanaman

Tanaman yang diuji pada penelitian ini adalah daun dan

batang tusuk konde (Heliotropium indicuni L.) serta daun pacar

cina (Aglaia odorata Lour) dari daerah Bogor (Jabar); daun, kulit,

batang, dan akar talatak manuk (Dysoxylum excelsum BI.); akar

belimbing wuluh (Averrhoa bilimbi L.), kulit batang dadap-srep

(Erythrina hypophorus Boerl); daun dan batang benalu

mesisien; dan kulit batang kenanga hitam dari daerah Palangka

Raya (Kalteng).

Contoh tanaman dikeringkan dengan mengangin-anginkan

pada suhu kamar, selanjutkan dipotong-potong kecil dan diblend

dengan Bamix sampai halus. Sebanyak 50 gram bubuk kering

diblend dengan 300 ml etanol selama 2 menit, kemudian disaring

dengan penyaring Buchner. Filtrat yang diperoleh dikumpulkan,

sedangkan ampasnya diblend lagi dengan plarut yang sama

sebanyak 3 kali. Filtrat yang dikumpulkan diuapkan dengan ro-

tary evaporator dan diteruskan dengan aliran gas nitrogen sampai

seluruh etanol menguap, diperoleh sari kering. Selanjutnya dibuat

larutan baku dengan konsentrasi 2.500, 5.000, dan 10.000 ppm

dalam pelarut metanol, kemudian dilakukan uji bioaktivitasnya

terhadap, lekemia L1210.

Uji Bioaktivitas Sari Etanol Terhadap Sel Lekemia L1210.

Aktivitas sari etanot akar, kulit batang, batang maupun

daun diuji dengan menggunakan sel lekemia tikus (lekemia

L1210) yang diperoleh dan The institute of Physical and

Chemical Research (Riken), Jepang.

Tahap pengujian dilakukan sebagai berikut sel lekemia

L1210 dibiakkan dalam media Eagle MEM sehingga populasinya

mencapal 20x10

sel/ml. Pengujian contoh dilakukan dengan

menambahkan larutan baku masing-masing sebanyak 10 µl ke

dalam 1 ml suspensi sel sehingga konsentrasi zat uji adalah 25,50,

dan 100 ppm. Sebagai pembanding digunakan 10 µl metanol

yang telah ditambah 1 ml suspensi sel. Percobaan dilakukan

duplo. Selanjutnya suspensi sel yang telah diisi sari/zat uji tersebut

diinkubasi selama 2 hari pada suhu 37°C dalam inkubator CO

Setetah itu, jumlah sel yang masih hidup dihitung di bawah

mikroskop.

Persentase inhibisi/penghambatan sari etanol terhadap

pertumbuhan sel lekemia L1210 dihitung sebagai berikut:

.% Inhibisi = (1-A/B) x 100

A = Jumlah sel dalam media yang mengandung zal uji

B = Jumlah sel dalam media yang tidak mengandung zat uji

HASIL DAN PEMBAHASAN

Dari hasil ekstraksi menggunakan perlarut etanol pada Tabel

1. Dari tabel 1 tersebut terlihat bahwa rendemen yang diperoleh

dan ekstraksi tanaman menggunakan etanol 90% sangat

bervariasi dan berkisar antara 3,8 - 22,6%. Selanjutnya dari etanol

yang diperoleh diuji bioaktivitasnya terhadap sel lekemia L 1210.

Hasil penentuan 1C

dari sari etanol terhadap pertumbuhan sel

lekemia L1210 disajikan pada tabel 2.

Tabel 1. Rendemen sari etanol dan berbagai tanaman

Jenis Tanaman

Bagian

Tanaman

Rendemen

(%)

Bentuk & warna

ekstrak kasar

Tusuk konde

(Helitropium indicum L.)

batang

daun

6,0

6,2

sirup, hijau tua

Talatak manuk

(Dysoxylurn excelsum BL)

akar

batang

kulit batang

daun

3,8

4,4

4,6

18,7

sirup, coklat tua

Belimbing wuluh

(Avernhoa bilimbi L.)

akar 18,0

sirup.

merah

tua

Dadap srep

(Erythrina hyphoporus

Boerl)

kulit batang

8,2

sirup, coklat tua

Pacar cina

(Aglaia odorata Lour)

daun

8,6

sirup, hijau tua

Benalu masisien

batang

daun

22,3

22,6

sirup, coklat tua

Kenanga hitam

akar

11,2

sirup, coklat tua

* Bobot sari etanol per bobot kering tanaman

Dari Tabel 2 tertihat bahwa selain akar kenanga hitam, contoh

tanaman yang diuji menunjukkan aktif menghambat pertumbuhan

sel lekemia L1210 dengan 1C

3 1 ppm. 1C

(inhibition Con-

centration) adalah konsentrasi zat uji yang menyebabkan

terhambatnya pertumbuhan sel sebesar 50%. Hasil pengujian ini

secara tuntas masih memerlukan waktu yang cukup panjang.

Di dalam sari etanol yang aktif menghambat pertumbuhan

sel lekemia L1210 ini diperkirakan ada satu atau lebih komponen

yang benar-benar aktif berperan sebagai zat anti lekemia,

sehingga pemisahan tebih lanjut mutlak diperlukan. Oleh karena

itu dicoba dilakukan pemisahan terhadap sari daun tusuk konde

mengunakan sep-pak cartridge (absorben florisil C-18) dengan

Cermin Dunia Kedokteran No. 120, 1997

Tabel 2. Nilai IC

dari sari etanol terhadap pertumbuhan sel lekemia L1210

Tanaman

Bagian

Tanaman

(ppm)

Anti

lekemia

Tusuk konde

(Helitropium indicum 1..)

batang

daun

< 25

Talatak manuk

(Dysoxylum excelcunt Bl.)

akar

batang

kulit hatang

daun

< 25

Belimbing wuluh

(Avernhoa bilimbi L.)

akar <

Dadap srep

(Erythrina hyphoporus

Boerl)

kulit batang

< 25

Pacar cina

(Aglaia odorata Lour)

dauu <

Benalu masisien

hatang

daun

< 25

Kenanga hitam

akar

> 100

Keterangan : + = aktif menghambat pertumbuhan sel lekemia L1210

- = tidak/kurang uktif menhambat pertumbuhan sel lekemia

L1210

eluen campuran metanol : air = 1:2. 1:1, 2:1, 3:1 dan 1:0. Residu

yang diperoleh diuji bioaktivitasnya terhadap sel lekemia. Hasil

pengujian disajikan pada Tabel 3.

Tabel

Aktifitas fraksi sep-pak cartridge dalam menghambat

pertumbuhan sel lekemia L1210 dengan konsentrasi zat uji = 15 ppm

Komposisi eluen

(MeOH:H 20)

Kons. Zat uji

(ppm)

Inhibisi

(%)

1 1

15 71

1 : 1

2 : 1

3 : 1

1 : 0

Dari Tabel 3 tersebut terlihat bahwa komposisi terakhir, yaitu

elusi dengan metanol saja memberikan residu yang paling aktif

menghambat pertumbuhan sel lekemia L1210, yaitu 88% untuk

konsentrasi zat uji sebesar 15 ppm. Setelah perlakuan ini

dilakukan berulang kali untuk memperoleh residu yang cukup,

maka selanjutnya dipisahkan dengan cara kromatografi cair

kinerja tinggi (KCKT) menggunakan kolom ODS semi preparatif

(25 x 2,2 cm) dengan eluen campuran metanol : air = 85 : 15,

detektor UV pada panjang gelombang 254 nm. Dari pemisahan

ini diperoleh 7 (tujuh) bagian, yaitu A, B, C, D, E, F, dan G

(Gambar 1). Setelah dikeringkan, masing-masing diuji

bioaktivitasnya terhadap sel lekemia L1210.

Hasil pengujian disajikan pada Tabel 4.

Dari Tabel 4 tersebut terlihat bahwa semua fraksi rempunyai

aktivitas menghambat pertumbuhan sel lekemia L1210 dengan

6,8 ppm. Usaha pemurnian lebih lanjut terhadap masing

masing fraksi untuk mendapatkan komponen murni sedang

dilakukan.

Gambar 1. Kromatogram KCKT dan residu sep-pak cartridge

Tabel 4. Hasil uji bioaktivitas fraksi KCKT terhadap pertumbuhan sel

lekemia L1210

Inhibisi

(%)

Bagian

Kons. zat uji

2,5 ppm

Kons. zat uji

5 ppm

Kons. zat uji

10 ppm

IC50

(pp

)

A 100 100

2.5

B - 88 99

C 99 99

2,5

D 93 99

2,5

E 63 77

F 46 57

6,8

G 58 68

- : Tidak dilakukan pengujian

KESIMPULAN

Sebanyak enam dari tujuh contoh tanaman yang diuji yaitu,

tusuk konde, talatak manuk, belimbing wuluh, dadap srep, pacar

cina, dan benalu masisien menunjukkan aktivitas terhadap

penghambatan sel lekemia L1210 dengan nilai 1C

31 ppm,

sedangkan satu tanaman yaitu kenanga hitam tidak aktif dengan

100 ppm. Pemurnian lebih lanjut terhadap sari etanol daun

tusuk konde dengan menggunakan sep-pak cartridge florisil C-

18 dilanjutkan dengan KCKT diperoleh tujuh fraksi yang belum

murni, yaitu fraksi A, B, C, D, E, F, dan G, Ke tujuh fraksi tersebut

semuanya aktif dengan 1C 6,8 ppm.

UCAPAN TERIMA KASIH

Ucapan terima kasih disampaikan kepada Bp. D Made Sumatra, MS dan

Sdr Hendig Winarno, M.Sc dan Lab. Kimia PAIR-BATAN yang relal,

memberikan saran dan nasihatnya serta Sdri. Aryanti, B.Sc. Sdr Firdaus, dan

Sdr Suhanda yang telah membantu melakukan persiapan dan bioassay.

KEPUSTAKAAN

1. Winandibrata, E. S., Pola Penderita Lekemia, Medan, 1976.

2. Cordell G A. Recent experimental and clinical data concerning antitumor

and cytotoxic agents from plants. Dalam : Wagner H Wolf P. 9eds.) New

Natural Products and Drugs with Phaniacological. Biological or Therapeu-

tical Activity. Springer-Verlag Pub, Berlin, 1977; hal. 54-81.

Cermin Dunia Kedokteran No. 120, 1997 43