Cermin Dunia Kedokteran

HASIL PENELITIAN

Efek Ekstrak Daun Kembang Bulan

(Tithonia diversifolia A. Gray)

terhadap Candida albicans

serta Profil Kromatografinya

Asri Sulistijowati S*, Didik Gunawan**

Pusat Penelitian dan Pengembangan Farmasi, Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan

Departemen Kesehatan RI, Jakarta

** Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta

ABSTRAK

Telah dilakukan uji mikrobiologi terhadap hambatan pertumbuhan Candida

albicans oleh ekstrak petroleum eter dan fraksi etil asetat daun Kembang Bulan

(Tithonia diversifolia A. Gray.), serta pemeriksaan golongan kimia yang terdapat dalam

daun tanaman tersebut.

Pemeriksaan golongan kimia tanaman dan aktivitas menghambat pertumbuhan C.

albicans dilakukan dengan cara terlebih dahulu mengekstraksi serbuk kering memakai

alat soxhlet menggunakan pelarut petroleum eter dilanjutkan etanol 80%, serta

diekstraksi cair-cair menggunakan etil asetat.

Uji mikrobiologi dilakukan terhadap ekstrak petroleum eter, fraksi etil asetat,

fraksi air dan ekstrak air pada media pertumbuhan C. albicans (Sabouraud) dengan

metode dilusi padat. Konsentrasi ekstrak yang digunakan adalah 40% dan 80%.

Pengamatan dilakukan 24 jam setelah penanaman. Secara kualitatif, pada konsentrasi

80% ekstrak petroleum eter dan fraksi etil asetat menghambat secara nyata, sedang

pada konsentrasi 40% terjadi pengurangan kepadatan pertumbuhan (dibandingkan

dengan kontrol). Fraksi air dan ekstrak air tidak menghambat pertumbuhan C. albicans.

Pemeriksaan golongan kimia tanaman dilakukan dengan metode kromatografi

lapis tipis menggunakan berbagai variasi komposisi pelarut dan pereaksi warna. Hasil

pemeriksaan golongan kimia tanaman menunjukkan bahwa Kembang Bulan

mengandung sedikitnya 12 senyawa terpenoid, 14 senyawa flavonoid dan gula. Pada

daun, dengan metode kromatografi lapis tipis, tak terdeteksi adanya alkaloid dan

triterpenoid.

Kata kunci: aktivitas antifungi, skrining fitokimia, Candida albicans, Tithonia

diversifolia A. Gray.

PENDAHULUAN

Dilaporkan bahwa tanaman suku Compositae mempunyai

aktivitas dapat menghambat pertumbuhan Candida albicans.

Tanaman Kembang Bulan termasuk dalam suku Compositae,

sehingga secara kemotaksonomi diduga tanaman ini juga

mempunyai kandungan kimia serupa yang dapat menghambat

pertumbuhan C. albicans

(1)

. Oleh karenanya dilakukan pene-

litian terhadap tanaman ini, untuk membuktikan secara ilmiah

aktivitas menghambat pertumbuhan C. albicans.

Kembang Bulan mempunyni beberapa nama, di antaranya

Rondose-moyo (Jawa), Harsaga (Jawa), Kembang Bulan

(Indonesia), Mary Gold (Inggris)

(2)

. Merupakan perdu tegak,

Cermin Dunia Kedokteran No. 130, 2001

Disampaikan pada Simposium Penelitian Bahan Obat Alami IX di

Yogyakarta tanggal 12-13 November 1997.

apabila dibiarkan tumbuh liar dapat mencapai tinggi 9 meter,

bertunas, merayap dalam tanah. Termasuk tanaman penutup

tanah yang umumnya tumbuh liar di tempat-tempat curam,

misalnya di tebing-tebing, tepi sungai dan selokan. Sekarang

banyak ditanam sebagai tanaman hias, karena warna bunganya

yang kuning indah. Selain itu Kembang Bulan sering ditanam

untuk pagar dan untuk mencegah kelongsoran tanah. Tumbuh

dengan mudah di tempat atau daerah berketinggian 5-1500

meter di atas permukaan laut. Tanaman ini juga merupakan

tumbuhan tahunan yang menyukai tempat-tempat terang dan

banyak sinar matahari langsung.

Daun tanaman Kembang Bulan memberikan hasil tes

positif terhadap hemolisis, dan hasil tes negatif untuk

flavonol-flavonol, alkaloid-alkaloid, tanin-tanin dan sterol-

sterol

(3)

BAHAN

Bahan utama adalah serbuk kering daun Kembang Bulan

dari tanaman yang tumbuh di daerah Kaliurang, Kabupaten

Sleman, Daerah Istimewa Yogyakarta. Daun dipilih yang

segar, permukaannya tidak rusak atau utuh, tidak berpenyakit

dan dipetik daun ke empat atau ke lima dari pucuk tanaman.

Daun kemudian dikeringkan di bawah sinar matahari dengan

ditutup kain warna gelap. Setelah cukup kering, dihaluskan

dengan cara ditumbuk. Ekstraksi bahan dilakukan seperti

ditunjukkan pada skema di bawah ini (Gambar 1).

METODE

1) Skrining fitokimia

a) Analisis kandungan ekstrak P.E.

Analisis menggunakan metoda KLT. Ekstrak P.E. di-

pekatkan. Pemeriksaan terhadap adanya terpenoid mengguna-

kan: FD Silika gel GF

254

, FG heksana-etil asetat (81:19),

deteksi Vanilin asam sulfat. FD sebelumnya dieluasi meng-

gunakan petroleum-eter-paraffin cair (95:5). Pemeriksaan tri-

terpenoid: FD Silika gel GF

254

, FG heksana-etil asetat (81:19),

deteksi Liebermann-Burchard.

b) Analisis kandungan ekstrak etanol.

Dilakukan pemeriksaan terhadap flavonoid menggunakan:

FD Silika gel GF

254

, FG etil asetat-asam formiat-asam asetat

air (100:11:11:27) (Wagner et al., 1984), deteksi sinar UV 366

nm (sesudah diuapi amonia); FD kertas Whatman no. 51, FG

t-butanil-asam asetat-air (6:2:1) (fase butanol) atau disebut

t-BAW (Harborne, 1987), deteksi sinar UV 366 nm (sesudah

diuapi amonia). Pemeriksaan alkaloid: FD Silika gel GF

254

, IG

etil asetat-metanol-air (100:13,5:10) (Wagner et al., 1984),

deteksi sinar UV 254 nm dan 366 nm, pereaksi warna

Dragendorff.

c) Analisis kandungan fraksi etil asetat.

Ekstrak etanol diekstraksi cair-cair menggunakan etil

asetat dan air. Pemeriksaan flavonoid: FD selulosa; FG asam

asetat 30%, asam klorida-asam asetat-air (3:30:10), asam

klorida-asam asetat-air (Forestal) (10:30:10), t-butanol-asam

asetat-air (6:2:1) (fase butanol), n-butanol-asam asetat-air

(n-BAW) (4:1:5); deteksi sinar UV 254 dan 366 nm (sesudah

diuapi amonia) dan pereaksi warna Sitroborat.

d) Analisis kandungan fraksi air.

Gambar 1. Skema kerja pembuatan ekstrak dan fraksi

Diperlakukan sama seperti pada fraksi etil asetat.

e) Analisis kandungan ekstrak air.

Pemeriksaan adanya flavonoid: FD selulosa, FG asam

asetat 15%, deteksi pereaksi warna Sitroborat. Pemeriksaan

gala: FD selulosa, FG t-butanol-etil asetat-air (6:2:1) (fase

butanol), deteksi sinar tampak dan pereaksi Anilin ftalat.

2) Pemeriksaan

mikrobiologi

Bagian lain dari ekstrak P.E., fraksi etil asetat, fraksi air

dan ekstrak air (setelah disisihkan 5 ml untuk uji KLT),

digunakan untuk pemeriksaan mikrobiologi terhadap C.

albicans. Dibuat media pertumbuhan C. albicans, yaitu Sa-

bouraud. Air sebagai pelarut agar, dikurangi dari yang se-

harusnya dan kekurangan pelarut diganti dengan larutan eks-

trak hingga didapat konsentrasi 40% dan 80% ekstrak dalam

media. Tiap petri berisi

±20 ml agar. Juga dibuat media kon-

trol berisi, pelarut masing-masing. Pelarut ekstrak P.E. dan

fraksi etil asetat adalah PEG 400 sedang fraksi air dan ekstrak

air adalah air (Gambar 2).

HASIL DAN PEMBAHASAN

Terhadap ekstrak P.E. diperiksa adanya terpenoid dan

triterpenoid. Deteksi adanya tefipenoid menggunakan pereaksi

Cermin Dunia Kedokteran No. 130, 2001 33

Gambar 2. Skema kerja pemeriksaan aktivitas antifungi C. albicans

warna Vanilin-asam sulfat; bila terdapat terpenoid maka warna

bercak berkisar antara biru sampai ungu. Penyemprotan

dilakukan terhadap kromatogram terimpregnasi menggunakan

fase gerak terpilih, heksana-etil asetat (81:19), dengan hasil

sebagai berikut (Gambar 3) :

Gambar 3. Kromatogram uji terpenoid ekstrak P.E.

Deteksi

: Vanilin-asam sulfat

Keterangan : FG

: F dan G

: Silika Gel GF

254

terimpregnasi

Sehingga dapat disimpulkan bahwa ekstrak petroleum eter

mengandung sedikitnya 12 macam terpenoid. Salah satu se-

nyawa terpenoid tersebut kemungkinan adalah seskuiterpen

(4)

Golongan senyawa lain yang dicurigai terdapat dalam

ekstrak P.E. adalah triterpenoid. Dengan menggunakan fase

gerak terpilih untuk ekstrak petroleum eter, dan fase diam

diimpregnasi menggunakan parafin cair-petroleum eter (95:5)

dilakukan uji KLT menggunakan pereaksi warna Liebermann-

Burchard. Uji positif menunjukkan adanya triterpenoid apabila

warna hijau-biru

(5)

. Bercak diamati di bawah sinar UV 366 nm

setelah dipanasi 100°C selama 10 menit. Kromatogram disem-

prot dengan pereaksi wara Liebermann-Burchard terbentuk

bercak berwarna merah sebanyak 4 buah dan sebuah berwarna

pink, bercak terakhir diperkirakan klorofil. Karena tidak

memberikan warna yang positif terhadap adanya triterpenoid,

hijau-biru, maka disimpulkan tak terdapat adanya triterpenoid.

Terhadap ekstrak etanol dilakukan pemeriksaan terhadap

adanya flavonoid memakai fase gerak etil asetat-asam formiat-

asam asetat-air (100:11:11:27). Ekstrak memberikan bercak 3

buah pada cahaya tampak ataupun di bawah sinar UV 366 nm.

Sebuah berwarna pink dan dua bush berwarna kuning setelah

diuapi amonia. Hal ini meyakinkan bahwa dalam ekstrak

etanol terdapat flavonoid. Berdasarkan hal ini maka dilakukan

penelitian lebih lanjut terhadap berbagai fase gerak flavonoid.

Hasil penelitian diperoleh fase gerak terpilih adalah t-BAW

(6:2:1) untuk melihat bercak nonpolar dan Forestal (3:30:10)

untuk melihat bercak polar, dengan pereaksi warna Sitroborat.

Kromatogram pemeriksaan adanya flavonoid memakai fase

gerak terpilih adalah sebagai berikut (Gambar 4 dan 5) :

Gambar 4. Kromatogram uji flavonoid fraksi etil asetat

Deteksi

Sitroborat

Keterangan : FD

: Selulosa

: t-BAW (6:2:1)

Forestal

(3:30:10)

Forestal

(3:30:10)

Cermin Dunia Kedokteran No. 130, 2001

Gambar 5. Kromatogram uji flavonoid fraksi air

Deteksi

Sitroborat

Keterangan

Selulosa

FG : t-BAW (6:2:1)

Forestal

(3:30:10)

Forestal

(10:30:10)

Terhadap ekstrak air diperiksa adanya flavonoid sebab

diperkirakan di dalamnya terdapat flavonoid dalam bentuk

flikosida. Pemeriksaan dengan hasil sebagai berikut :

Gambar 6. Kromatogram uji flavonoid ekstrak air

Deteksi

Sitroborat

Keterangan : FD : Selulosa

FG : asam asetat 15%

Pemeriksaan tak menggunakan fase gerak Forestal sebab

ekstrak menggunakan pelarut air (polar), sehingga digunakan

pengembang polar juga.

Senyawa lain yang diperkirakan terlarut dalam ekstrak air

adalah gula. Hasil uji terhadap adanya gula adalah sebagai

berikut :

Gambar 7. Kromatogram uji gala ekstrak air

Deteksi

: Anilin ftalat

Keterangan : FD : Selulosa

FG : t-BAW (6:2:1)

Hasil kromatogram pemeriksaan terhadap adanya gula

menggunakan pereaksi warna Anilin ftalat memberikan empat

buah bercak yaitu warna coklat-kuning, kemerahan, kuning

dan coklat; bercak berwarna coklat-merah adalah glukosa dan

galaktosa, warna kuning fruktosa, merah arabinosa atau

ksilosa dan kuning adalah ramnosa

(5)

. Sehingga diperkirakan

dalam ekstrak air terdapat glukosa atau galaktosa, fruktosa,

arabinosa atau ksilosa dan ramnosa.

Pemeriksaan dilanjutkan dengan menguji hambatan per-

tumbuhan C. albicans akibat pemberian ekstrak P.E., fraksi

etil asetat, fraksi air dan ekstrak air. Uji mikrobiologi dilaku-

kan dengan metode dilusi. Pertumbuhan C. albicans tidak

sama dengan pertumbuhan mikroba. Mikroba tumbuh di

permukaan, sedang jamur mempunyai hifa sehingga pertum-

buhannya menembus ke dalam media, akibatnya konsentrasi

untuk menghambat pertumbuhan diperlukan lebih besar.

Digunakan dua macam konsentrasi ekstrak yaitu konsentrasi

besar (80%) dan kecil (40%) dengan maksud membuktikan

secara kualitatif ada tidaknya pertumbuhan jamur akibat pem-

berian ekstrak. Hasil menunjukkan bahwa pada konsentrasi

40% ada pertumbuhan namun kerapatannya kurang dibanding

kontrol. Sedang pada konsentrasi tinggi (80%) ada hambatan

pertumbuhan secara nyata. Ini berarti bahwa konsentrasi tinggi

dapat menghambat tetapi pada konsentrasi rendah pertum-

buhan tak dapat dihambat seluruhnya. Pengamatan dilakukan

Cermin Dunia Kedokteran No. 130, 2001 35

24 jam setelah penanaman menunjukkan bahwa hanya ekstrak

P.E. dan etil asetat saja yang dapat menghambat sedang eks-

trak dan fraksi air tidak.

KEPUSTAKAAN

1. Towers GHN, Wat, Chit-Kit, Graham AE, Bandoni RJ. Ultraviolet

Mediated Antibiotic Activity of Species of Compositae Coused by

Polyacetylenic Compound, Lloydia,1977 : 40(5).

KESIMPULAN

2. Steenis CGGJ. Flora untuk sekolah di Indonesia, diterjemahkan oleh

Moeso Soerjowinoto, Soenarto Hardjosuwarno, Soerjo Sodo

Hadisewojo, Wibisono; korektor Moeso Soerjowinoto, P.T. Pradnya

Paramita, Jakarta, 1978.

1. Daun Kembang Bulan dapat menghambat pertumbuhan

C. albicans.

2. Ekstrak dan fraksi petroleum eter dapat menghambat

pertumbuhan C. albicans.

Watt JM, Brayer-Brandwijck, Gerdina M. The Medical and Poisonous

Plants of Shoutern and Eastern Africa, 2

ed., Livingstone Ltd.,

Edinburgh, London, 1962.

3. Daun Kembang Bulan sedikitnya mengandung 12 se-

nyawa terpenoid, 14 senyawa flavonoid dan gula.

Baruah NC, Sharma RP, Madhusudana KP, Thygarajan, Gopalakrisna,

Werner H, Murary, Ramaswamy. Sesquiterpen Lactones of Tithonia

diversifolia A. Gray. Chemical Abstrack 1979; 91(20751): 678.

4. Dengan metode KLT tidak terdeteksi adanya alkaloid dan

triterpenoid.

Harborne JB. Metode Fitokimia - Penuntun Cara Modern Menganalisis

Tumbuhan, hal. 123-138. Penerbit ITB, Bandung, 1987.

SARAN

6. Wagner H, Bladt S, Zginski EM. Plant Drug Analysis A Thin Layer

Chromatography Atlas. Springer Verlag, Tokyo, 1984 : p. 5-8, 51-58,

125-127, 163-167,225-228.

Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut terhadap flavonoid

yang dicurigai dapat menghambat pertumbuhan C. albicans.

Biar cepat sembuh.....

....habis lengan

terus bokong,

ya pak dokter

Cermin Dunia Kedokteran No. 130, 2001