Cermin Dunia Kedokteran

HASIL PENELITIAN

Uji Patogenisitas Isolat

B. thuringiensis yang Ditumbuhkan

dalam Buah Kelapa terhadap

berbagai Jentik Nyamuk

di Laboratorium

Blondine Ch P, RA Yuniarti

Stasiun Penelitian Vektor Penyakit, Pusat Penelitian Ekologi Kesehatan

Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan, Departemen Kesehatan Rl, Salatiga

ABSTRAK

Bacillus thuringiensis merupakan salah satu spesies bakteri yang digunakan untuk

pengendalian jentik nyamuk. Bakteri ini perlu dikembangkan mengingat pentingnya

pelestarian lingkungan yang bebas insektisida.

Ditemukannya bakteri patogen B. thuringiensis (100 PS) yang diisolasi dari habitat

tanah dan ditumbuhkan dalam buah kelapa.

Tujuan penelitian ini untuk mengetahui patogenisitas isolat B. thuringiensis (100

PS) yang ditumbuhkan dalam buah kelapa terhadap berbagai jentik nyamuk.

Isolat B. thuringiensis (100 PS) yang ditumbuhkan dalam media kimiawi Tryptose

Phosphate Broth (TPB) sebagai standar.

Hasil pengujian patogenisitas isolat B. thuringiensis (100 PS) yang ditumbuhkan

dalam buah kelapa dan media TPB terhadap jentik nyamuk Anopheles aconitus, An.

barbirostris, Aedes aegypti, dan Culex quinquefasciatus, menunjukkan patogenisitas >

50% selama 24 dan 48 jam pengujian. Tidak ada perbedaan yang bermakna antara

persentase kematian jentik yang diuji dari isolat yang ditumbuhkan dalam buah kelapa

dan media TPB (p > 0,05). Buah kelapa dapat digunakan sebagai medium untuk

pertumbuhan B. thuringiensis.

Kata kunci : B. thuringiensis, kelapa, patogenisitas, jentik nyamuk

PENDAHULUAN

Di daerah tropis seperti Indonesia, nyamuk merupakan

serangga yang sering mengganggu kehidupan manusia. Di

samping itu nyamuk juga dapat menyebarkan penyakit seperti

malaria, demam berdarah dengue dan filariasis. Untuk meng-

atasi hal tersebut, manusia lebih cenderung menggunakan

insektisida misalnya etofenprox untuk penyemprotan rumah-

rumah. Selain itu dapat pula menggunakan obat pembasmi

nyamuk yang dijual bebas seperti obat nyamuk bakar, tissue,

oles, elektrik dan sebagainya. Mengingat banyaknya bahan

aktif insektisida yang mudah diperoleh, dan kemungkinan besar

dapat menyebabkan pencemaran lingkungan, mendorong di-

kembangkannya jazad hayati seperti Bacillus thuringiensis.

Salah satu kelebihan bakteri ini adalah sifatnya yang spesifik

sehingga dapat menekan populasi jentik nyamuk, narnun tidak

mencemarkan lingkungan, atau mematikan organisme lain yang

bukan sasaran.

Salah satu karakteristik dari B. thuringiensis adalah dapat

memproduksi kristal protein di dalam sel bersama-sama dengan

spora pada waktu sel mengalami sporulasi

(1)

Laboratorium jazad hayati Stasiun Penelitian Vektor Pe-

nyakit telah berhasil mengisolasi B. thuringiensis dari tanah dan

menumbuhkan bakteri tersebut pada media air kelapa dan en-

dosperm kelapa (santan), dengan patogenisitas > 50% terhadap

jentik nyamuk Ae. aegypti dan Cx. quinquefasciatus

(2)

Suatu penelitian yang dilakukan di "Alexander von Hum-

boldt Tropical Medicine Institute" di Lima, Peru adalah me-

numbuhkan B. thuringiensis israelensis dalam media alami

Cermin Dunia Kedokteran No. 131, 2001

buah kelapa sebab kelapa kaya akan asam amino dan karbo-

hidrat

(3)

. Selain itu kelapa relatif rnurah, dapat diperoleh setiap

saat dan terdapat dimana-mana. Sedangkan media kimia seperti

agar nutrien, "NYSMA", "NYPC" dan Triptose Phosphate

Broth yang merupakan media baku untuk pertumbuhan B.

thuringiensis harganya mahal dan tidak mudah diperoleh. Ber-

dasarkan informasi di atas, maka penelitian ini dilakukan untuk

mengetahui patogenisitas isolat B. thuringiensis (100 PS) yang

ditumbuhkan dalam buah kelapa terhadap berbagai jentik

nyamuk di laboratorium.

BAHAN DAN CARA KERJA

A. Bahan Penelitian

Media yang digunakan adalah buah kelapa serta media

Tryptose Phosphate Broth (TPB) sebagai media standar.

Isolat B. thuringiensis (100 PS) yang diperoleh dari hasil

isolasi dari habitat tanah menurut metode Chilcott dan Wigley

(1988)

(4)

. Buah kelapa yang digunakan adalah kelapa kering

yang beratnya sekitar 1250 gram dan berisi air kelapa sebanyak

500 ml. Sebelum digunakan, terlebih dahulu tempurung kelapa

dibersihkan dengan alkohol 70%. Jentik nyamuk vektor yang

digunakan dalam penelitian ini adalah Anopheles aconitus, An.

barbirostris, Aedes aegypti dan Culex quinquefasciatus masing-

masing instar III, hasil koloni di laboratorium.

Cara Kerja

Pertumbuhan dan Uji Patogenesitas Isolat B. thuringiensis

(100 PS) sebagai berikut :

Isolat B. thuringiensis (100 PS) yang ditemukan dibuat

kultur murni pada media "NYSMA" miring dan diinkubasi

pada suhu 30°C selama 4 hari. Sesudah diinkubasi dari media

"NYSMA" diambil 10 ose penuh (loopfull) dan dimasukkan ke

dalam 50 ml Tryptose Phosphate Broth (TPB). Sesudah itu

media TPB di shake (goyang) pada temperatur kamar selama

48 jam. Sesudah 48 jam, biakan murni pada media TPB di-

masukkan ke dalam buah kelapa dan diinkubasi selatna 6 hari

pada temperatur kamar. Sesudah 6 hari, dilakukan pengujian

patogenisitas menurut metode Chilcott dan Wigley

(4)

, sebagai

berikut :

Ambil 15 ml broth (diambil dari 50 ml TPB) dan dimasuk-

kan ke dalam mangkok plastik berisi 100 ml air suling dan 25

jentik An. aconitus instar III (umur 6-7 hari). Sebagai kontrol,

mangkok plastik hanya diisi 150 ml air suling dan 25 jentik An.

aconitus. Untuk setiap perlakuan dilakukan 3 kali ulangan.

Pengamatan dilakukan selama 24 dan 48 jam pengujian. Uji

patogenisitas terhadap An. barbirostris, Ae. aegypti dan Cx.

quinquefasciatus dilakukan dengan cara yang sama.

Biakan murni isolat B. thuringiensis (100 PS) yang di-

simpan pada media "NYSMA", diambil 2 ose penuh (loopfull)

dan dimasukkan ke dalarn 50 ml TPB sebagai media kimiawi

(media standar). Media TPB di shake (goyang) pada temperatur

kamar selama 48 jam. Sesudah 48 jam, pengujian patogenisitas

dilakukan menurut metode Chilcott dan Wigley (1988)

(4)

se-

bagai berikut :

Ambil 15 ml broth (diambil dari 50 ml TPB) dan dimasuk-

kan ke dalatn mangkok plastik berisi 100 ml air suling dan 25

jentik An. aconitus instar III (umur 6-7 hari). Sebagai kontrol,

mangkok plastik hanya diisi 150 ml air suling dan 25 jentik An.

aconitus. Untuk setiap perlakuan dilakukan 3 kali ulangan.

Pengamatan dilakukan selama 24 dan 48 jam pengujian. Uji

patogenisitas terhadap jentik An. barbirostris, Ae. aegypti dan

Cx. quinquefasciatus dilakukan dengan cara yang sama.

HASIL DAN PEMBAHASAN

Hasil pengujian patogeiusitas isolat B. thuringiensis (100

PS), setelah ditumbuhkam dalam buah kelapa terhadap ber-

bagai jentik nyamuk instar III pada 24 dan 48 jam pengajuan,

disajikan pada Tabel 1.

Uji patogenisitas isolat B. thuringiensis (100 PS) yang

ditumbuhkan dalam buah kelapa terhadap jentik An. aconitus,

An. barbirostris, Ae. aegypti dan Cx. quinquefasciatus masing-

masing instar IlI, menunjukkan potogenisitas > 50% pada 24

dan 48 jam pengujian. Persentase kematian jentik An. aconitus,

An. barbirostris, Ae. aegypti dan Cx. quinquefasciatus, berturut

-turut 76%, 78%, 97% dan 74% selama 24 jam pengujian dan

100%, 92%, 100% dan 100% pada 48 jam pengujian (Tabel 1).

Uji patogenisitas isolat B. thuringiensis (100 PS) yang

ditumbuhkan dalarn media kimiawi TPB terhadap jentik An.

aconitus, An. barbirostris, Ae. aegypti dan Cx. quinquefasciatus

masing-masing instar III, menunjukkan patogenisitas > 50%.

Persentase kematian jentik An. aconitus, An. barbirostris, Ae.

aegypti dan Cx. quinquefasciatus berturut-turut 73%, 80%,

78% dan 65% selama 24 jam pengujian dan 100%, 100%,

100% dan 88% pada 48 jam pengujian.

Uji yang dilakukan terhadap persentase kematian jentik An.

aconitus, An. barbirostris, Ae. aegypti dan Cx. quinquefasciatus

dari isolat yang ditumbuhkan dalam buah kelapa dan media

TPB, tidak menunjukkan beda nyata pada 24 maupun 48 jam

pengujian (p > 0,05). Hal ini berarti bahwa buah kelapa dapat

digunakan sebagai media pengganti TPB. Walaupun tidak ada

perbedaan yang bermakna, akan tetapi isolat. Bacillus

thuringiensis (100 PS) yang ditumbuhkan dalam buah kelapa

menunjukkan patogenisitas tinggi terhadap jentik Ae. aegypti

yaitu 97% selama 24 jam pengujian dan 100% pada 48 jam

Tabel 1. Hasil uji patogenisitas isolat B. thuringiensis (100 PS) yang ditumbuhkan dalam buah kelapa

terhadap berbagai jentik nyamuk instar III.

Persentase kematian berbagai jentik nyamuk*

An. aconitus

An. barbirostris

At. aegypti Cx.

quinquefasciatus

Isolat Media

24 jam 48 jam 24 jam

48 jam

24 jam

48 jam

24 jam

48 jam

100

Kelapa

TPB

100

* = rata-rata 3 kali ulangan

Cermin Dunia Kedokteran No. 131, 2001 21

pengujian. Hal ini mungkin dapat dipengaruhi oleh beberapa

faktor misalnya kebiasaan dan perilaku makan jentik, formulasi

(khususnya tingkat pengendapan/sedimentasi) serta adanya

toksin di daerah makan jentik (larval feeding zone)

(5,6)

. Ber-

dasarkan faktor daerah makan jentik dan tingkat sedimentasi/

pengendapan, dapat diduga bahwa toksin B. thuringiensis lebih

cepat mengendap ke bawah di dasar yang merupakan daerah

makan jentik Ae. aegypti daripada di bawah permukaan air

(suspension feeders) yang merupakan daerah makan bagi jentik

Cx. quinquefasciatus

(7)

. Sedangkan jentik Anopheles yang

mempunyai kebiasaan mengambil makanan (termasuk toksin)

di daerah permukaan (lebih kurang 1-2 mm) dan bukan di

dasar

(8)

. Setelah melihat persentase kematian berbagai jentik

nyamuk yang > 50%, maka perlu dilakukan serologi dari isolat

B. thuringiensis (100 PS) tersebut untuk mengetahui serotipe-

nya. Sampai dengan saat ini telah dikenal 58 antisera - H

standar, untuk menentukan serotipe bakteri B. thuringiensis

yang diperoleh dari Institut Pasteur Perancis (Happy Widiastuti,

Komunikasi Pribadi).

Bacillus thuringiensis serotipe H-14 telah diketahui mem-

punyai patogenisitas tinggi terhadap jentik nyamuk dan jentik

lalat hitam

(1)

. Asam amino dan karbohidrat yang dikandung

buah kelapa merupakan sumber protein bagi pertumbuhan B.

thuringiensis. Karena itu buah kelapa dapat digunakan sebagai

media alami yang perlu dikembangkan lebih lanjut untuk per-

tumbuhan B. thuringiensis.

KESIMPULAN DAN SARAN

Patogenisitas isolat B. thuringiensis (100 PS) yang di-

tumbuhkan dalam buah kelapa terhadap jentik An. aconitus, An.

barbirostris, Ae. aegypti dan Cx. quinquefasciatus menunjuk-

kan patogenisitas > 50% pada 24 dan 48 jam pengujian.

Tidak ada perbedaan yang bermakna antara persentase ke

matian jentik An. aconitus, An. barbirostris, Ae. aegypti dan

Cx. quinquefasciatus dari isolat yang ditumbuhkan dalam buah

kelapa dan media Tryptose Phosphate Broth (p > 0,05).

Buah kelapa dapat digunakan sebagai medium alami untuk

pertumbuhan B. thuringiensis.

Penelitian ini akan dikembangkan lebih lanjut dengan

menggunakan kelapa sebagai media untuk pertumbuhan B.

thuringiensis sehingga dapat digunakan untuk pengendalian

jentik nyamuk di lapangan.

KEPUSTAKAAN

WHO. Data sheet on the biological control agent Bacillus thuringiensis

serotype H-14. 1979. WHO/VBC/79.750.13p.

2. Blondine ChP, Widyastuti U, Sukarno, Subiantoro. Pertumbuhan isoltt

Bacillus thuringiensis pada media kelapa dan uji patogenisitasnya

terhadap jentik nyamuk vektor. Cermin Dunia Kedokt. 1997; 119: 50-3.

3. Anonim. Malaria Control in a Nutshell International Development

Research Centre. 2p. 1995.

4. Chilcott CN, Wigley PJ. Technical note: an improved method for

differential staining of Bacillus thuringiensis crystals. Letters in Appl

Microbiol 1988;7: 67-70.

5. Aly C, Mulla MA, Bo-Zhaoxu, Schnetter W. Rate of ingestion by

mosquito larvae (Diptera, Culicidae) as a factor in the effectiveness of a l

stomach toxin. J. Med. Entomol. 1988; 25(3): 191-6.

6. Chilcott CN, Pillai JS. The use of coconut wastes for the production

Bacillus thuringiensis var. israelensis. 1985.

Becker N, Djakaria S, Kaiser A, Zulhasril O, Ludwig HW. Efficacy of a

new tablet formulations of an Asperogenous strain of Bacillus

thuringiensis israelensis against larvae of Aedes aegypti. Bull. Soc.

Vector Ecol. 1991 16(1):1-7.

8. Aly C, Mulla MS, Schnetter N, Bo-Zhaoxu. Floating bait formulations

increase effectiveness of B. thuringiensis var israelensis against

Anopheles larvae. J Am Mosq Contr Assoc. 1987.

RALAT

Pada CDK edisi No. 130/2001 halaman 54 terdapat kekeliruan judul naskah yang

berbunyi :

Teknik Imunodiagnostik dalam Masyarakat: I. Prinsip-prinsip dasar teknik

imunodiagnostik oleh Iwan H. Utama, I Nym. Suarsana.

Seharusnya:

Teknik Imunodiagnostik dalam Kesehatan Masyarakat: 1. Prinsip-prinsip dasar

teknik imunodiagnostik oleh Iwan H. Utama, I Nym. Suarsana

Demikian kekeliruan telah kami perbaiki dan terima kasih.

Redaksi

Living is not breathing, it is acting

(Rousseau)

Cermin Dunia Kedokteran No. 131, 2001