Cermin Dunia Kedokteran

HASIL PENELITIAN

Pengaruh Ekstrak Kulit Buah

Citrus aurantifolia Swingle

terhadap Kontraksi Trakea Marmot

Terisolasi yang Diinduksi Histamin

in vitro

- penelitian pendahuluan

R. Irawan

Pusat Pemeriksaan Obat dan Makanan, Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan

Departemen Kesehatan RI, Jakarta

ABSTRAK

Telah dilakukan penelitian farmakodinamik terhadap ekstrak kulit buah Citrus

aurantifolia Swingle yang dipadukan dengan aspek fitokimia. Dalam uji farmako-

dinamik, untuk melihat salah satu efek penghambatan kontraksi trakea marmot

terisolasi yang diinduksi histamin secara in vitro, maka reseptor-reseptor yang

mempunyai aksi antagonis perlu diblok dengan propranolol 10

-6

M dan simetidin 10

-5

M. Senyawa aktif yang dapat menghambat, pada identifikasi dengan spektroskopi

ultraviolet menggunakan pereaksi diagnostik, adalah flavanon.

PENDAHULUAN

Citrus aurantifolia Swingle atau yang dikenal masyarakat

dengan nama jeruk nipis merupakan tumbuhan obat dari

familia Rutaceae

(1,2,3)

. Dalam pengobatan tradisional diguna-

kan antara lain sebagai peluruh dahak dan obat batuk

(4)

Telah dilakukan penelitian yang menunjukkan adanya

senyawa flavanon di dalam kulit buah Citrus sp

(5-8)

. Peneliti

Jepang, melaporkan bahwa Citrus aurantifolia Swingle mem-

perlihatkan efek anti alergi

(9)

Dalam penelitian ini telah diisolasi dan diidentifikasi

senyawa flavonoid golongan flavanon dengan cara KLT, KLT

Bidimensional (dua dimensi) dan KLT Preparatif. Uji farma-

kodinamik terhadap isolat menggunakan trakea marmot ter-

isolasi yang diinduksi histamin secara in vitro dan identifikasi

komponen berkhasiat dengan cara spektroskopi-ultra-violet.

Tanaman Citrus aurantifolia Swingle mempunyai be-

berapa nama daerah dan nama Latin. Beberapa nama daerah

tersebut, di antaranya : jeruk nipis (Sunda), jeruk pecel (jawa),

liman kapus, liman nipis (Sumatera) dan lebih dikenal dengan

nama jeruk nipis (Indonesia)

(3,16)

. Sementara, nama Latin yang

sering dipergunakan, di antaranya : Citrus medica Linn; Citrus

acida Roxb., Brands.; Citrus limunulus Miq.; Lemo tenuis

Rumph dan Citrus aurantifolia Swingle

(2)

. Adapun sistema-

tikanya seperti berikut ini: Divisio : Spermatophyta, Sub-

divisio : Angiospermae, Classis : Dicotyledonae, Ordo :

Rutaceae, Familia : Citrus, Genus: Citrus medica Linn; Citrus

acida Roxb Brandis.; Citrus tenuis Rumph.; Citrus auranti-

folia Swingle

(1,2)

METODOLOGI

Penelitian ini mencakup aspek fitokimia yang dilanjutkan

dengan aspek farmakodinamik terhadap Citrus aurantifolia

Swingle.

1) Aspek Fitokimia

Kulit buah Citrus aurantifolia Swingle yang kering

dihancurkan dan dihaluskan kemudian diekstraksi dengan

menggunakan pelarut metanol-air (1:1). Ekstrak yang di-

peroleh diuapkan dengan menggunakan penguap-putar ber-

tekanan rendah sampai diperoleh fraksi metanol dan air.

Dilanjutkan pengawalemakan menggunakan petroleum eter

(40°-60°C), kemudian dilakukan penguapan kembali meng-

gunakan penguap-putar (evaporator) bertekanan rendah agar

Cermin Dunia Kedokteran No. 128, 2000 25

diperoleh fraksi petroleum eter dan air. Selanjutnya pada

fraksi yang mengandung flavanoid dilakukan uji farmako-

dinamik pendahuluan. Terhadap isolat flavonoid yang dapat

menghambat efek kontraksi trakea marmot terisolasi setelah

diinduksi histamin in vitro dilakukan identifikasi dengan

menggunakan spektroskopi-UV. Rangkaian keseluruhan dari

proses tersebut secara skemafis dapat dilihat pada bagan

berikut :

Serbuk kulit buah Citrus aurantifolia Swingle

Ekstraksi : MeOH-air (1:1)

Dipekatkan

Fraksi MeOH encer

Fraksi H

Ditambah

petroleum

eter

Dipekatkan

Fraksi petroleum

Fraksi air

eter

encer

Fraksi MeOH pekat

Dipekatkan

Fraksi petroleum

Fraksi air pekat

eter

pekat

2) Aspek Farmakodinamik

Pembuatan preparat trakea menggunakan metode

Timmermann dan Scheffer

(10)

. Marmot dibunuh dengan cara

memukul bagian belakang dekat kepala, kemudian trakea

dikeluarkan dan difiksasi dalam cawan petri yang telah berisi

larutan Krebs normal serta dialiri gas karbogen dengan suhu

37°C. Trakea dibersihkan dari jaringan-jaringan lain yang

masih melekat di sekelilingnya, kemudian dipotong-potong

melalui segmen-segmen tulang rawan dengan arah berlawanan

sedemikian rupa sehingga membentuk rangkaian cincin trakea,

(Gambar 1).

Gambar 1. Diagram skema pemotongan trakea marmot.

A - B : Otot polos trakea

C - D : Bagian trakea yang tidak terpotong

Selanjutnya salah satu ujung rantai trakea difiksasi di

dasar organ-bath volume 20 ml dan ujung yang lain dihubung-

kan dengan tranduser. Kemudian dilakukan ekuilibrasi selama

20 menu dan dilanjutkan dengan percobaan-percobaan sebagai

berikut

1. Trakea diinduksi histamin dengan langkah ½ log 10 mulai

kadar 10

-8

M sampai diperoleh efek maksimum.

2. Trakea diinduksi histamin dengan praperlakuan proprano-

lol 10

-6

M dan simetidin 10

-5

M yang digunakan sebagai kurva

baku.

3. Trakea diinduksi histamin dengan praperlakuan proprano-

lol 10

-6

M dan simetidin 10

-5

M serta perlakuan ekstrak kulit

buah Citrus aurantifolia Swingle dengan berat x mg sebagai

uji farmakodinamik pendahuluan.

4. Dilakukan percobaan seperti pada butir 3 di atas, tetapi

berat ekstrak diperbesar menjadi 2x atau 3x berat semula.

Analisis data dilakukan secara farmakodinamis, yaitu

hasil penghambatan efek kontraksi histamin dari trakea

marmot terisolasi karena perlakuan ekstrak kulit buah Citrus

aurantifolia Swingle yang mengandung senyawa flavonoid

dibandingkan dengan kurva baku histamin, sehingga diperoleh

prosen efek kontraksi dari ekstrak tersebut, dengan rumus

sebagai berikut :

% Efek kontraksi = a/b x 100%

a = kontraksi dari masing-masing kadar histamin

b = kontraksi maksimum untuk kurva baku histamin

Efek kontraksi trakea setelah penambahan histamin (H) yang

tercatat pada recorder, terlihaf pada Gambar 2.

Gambar

2. Hasil rekaman kontraksi trakea setelah penambahan

histamin (H)

Secara keseluruhan rangkaian proses tersebut dapat dilihat

pada skema 1.

BAHAN DAN ALAT

1) Bahan

Hewan uji marmot dengan berat badan 400 - 600 g dan

kulit buah Citrus aurantifolia Swingle.

Bahan uji farmakodinamik : DL-propranolol, simetidin

(semua dari Sigma Chemical) dan gas karbogen (campuran

antara 5% CO

dan 95 O

) dari PT. Aneka Gas dan Industri,

Semarang.

Larutan Krebs normal : natrium klorida, kalium klorida,

Cermin Dunia Kedokteran No. 128, 2000

magnesium sulfat, kalsium klorida dihidrat, glukosa mono-

hidrat, natrium hidrogen karbonat, natrium dihidrogen fosfat

monohidrat, natrium hidrogen karbonat, natrium dihidrogen

fosfat monohidrat (semua berkualitas "pro analisis" E. Merck).

Skema 1

Fraasi H

Uji Farmakodinamik

KLT

Pendahuluan

KLT dua dimensi

KLT

preparatif

Uji

Farmakodinamik

Zona

terpilih

Zona paling aktif

Identifikasi

dengan

Spektroskopi-UV

Bahan ekstraksi : metanol, petroleum eter (keduanya ber-

kualitas "pro analisis" (E. Merck), serta air kualitas ultra-

filtrasi NANOpure-II dari Laboratorium Farmakologi dan

Toksikologi Dasar, Fakultas Farmasi UGM, Yogyakarta.

Bahan KLT dan KLT Preparatif : fase diam selulosa dan

fase gerak asam asetat 15% (semuanya berkualitas E. Merck).

Bahan KLT dua dimensi : fase diam selulosa, fase gerak I.

t-butanol-asam asetat-air (3:1:1) serta fase gerak II. Asam

asetat 15%.

Bahan pereaksi diagnostik spektroskopi-UV : natrium

hidroksida 2,5% b/v dalam metanol, aluminium klorida 5%

b/v dalam metanol, asam klorida 0,5 N, serta asam borat

anhidrat, natrium asetat anhidrat, metanol p.a. (semua ber-

kualitas E. Merck).

2) Alat

Satu set peralatan operasi (gunting, pinset, jarum fiksasi,

skalpel, cawan petri, benang steril).

Alat uji farmakodinamik : "organ-bath" volume 20 ml,

thermostat (GDR., Fed. Rep. of Germany), thermomik type

(B. Brown, Fed. Rep. of Germany), isotonik lever tranducer

type 368 (HSE, Fed. Rep. of Germany), pemanas type M 22/1

(Framo-Gerato Technik, Fed. Rep. of Germany), vortex mixer

(CAT. M. Zippear GmbH. Etszenbach, Fed. Rep. of

Germany), dispenser pippete type 15415 (Gilson, France),

recorder (Kipp & Zonen BD41, the Netherlands).

Alat ekstraksi dan KLT : evaporator (Buchi, Switzerland),

bejana pengembang (Desaga, Japan), lampu-UV (Desaga,

Japan), seperangkat perlatan KLT (Desaga, Japan).

Alat identifikasi : Spektrofotometer UV/VIS type 150-20

Double-beam (Hitachi, Japan).

HASIL

Hasil uji ,farmakodinamik pendahuluan ternyata me-

nunjukkan bahwa ekstrak kulit buah Citrus aurantifolia

Swingle dapat menghambat efek kontraksi trakea marmot

terisolasi yang diinduksi histamin secara in vitro. Hal ini

terlihat dari adanya pengurangan efek kontraksi maksimum,

berturut-turut 28,61%, 37,60%, 43,99% (Tabel 1, Gambar 3).

Tabel 1. Pengurangan kontraksi maksimum dan pergeseran kurva

akibat induksi histamin setelah penambahan ekstrak kulit

buah Citrus aurantifolia Swingle.

Jumlah ekstrak

yang ditambahkan

(mg)

Pergeseran kurva

ke kanan

Pengurangan efek

kontraksi maksimum

(%)

0,90

4,50

9,00

0,18

0,02

0,23

28,61

37,60

43,99

· = kurva baku histamin ( n = 4)

o = 0,90 mg ekstrak (n = 4)

x = 0,90 mg ekstrak (n = 4)

= 9,00 mg ekstrak (n = 4)

Gambar 3. Kurva hubungan antara log dosis (histamin) vs % efek

(kontraksi) dengan perlakuan ekstrak kulit buah Citrus

aurantifolia Swingle.

Berdasarkan hasil uji farmakodinamik pendahuluan ter-

sebut, maka dilakukan sokletasi terhadap serbuk kulit buah

Citrus aurantifolia Swingle dengan menggunakan pelarut

metanol-air (1:1) serta dilakukan pengawalemakan dengan

menggunakan petroleum eter. Dari pemeriksaan terhadap

fraksi air, petroleum eter dan fraksi metanol, ternyata pada

fraksi air lebih cenderung memberi indikasi adanya senyawa

metanol, ternyata pada fraksi air lebih cenderung memberi

indikasi adanya senyawa flavonoid, sedang pada fraksi

petroleum eter dan metanol tidak demikian.

Pada deteksi dengan menggunakan sinar UV 366 nm

fraksi petroleum eter dan air berupa cairan taanwarna (tak

berwarna atau jernih), demikian juga pada deteksinya dengan

sinar UV 366 nm yang diberi uap amoniak. Sedang pada fraksi

air pada deteksi sinar UV 366 nm memberi warna kuning

kecoklatan dan pada deteksi menggunakan sinar UV 366 nm

yang disertai uap amoniak memberi warna coklat tua.

Dalam keadaan demikian berarti senyawa yang terdapat

Cermin Dunia Kedokteran No. 128, 2000 27

di dalam fraksi air berupa glikosida.

Selanjutnya pada fraksi air dilakukan pemisahan melalui

KLT yang ternyata pada uji Ease diam dan Ease gerak yang

terpilih adalah selulosa dan asam asetat 15% dengan memberi-

kan enam buah bercak yang mempunyai warna-warna jelas

dan dua bercak yang tanwarna. Keenam bercak berwarna ter-

sebut terpisah secara baik dan jelas pada deteksi menggunakan

sinar UV 366 nm yang diberi uap amoniak (Gambar 4).

Hasil kromatografi lapis tipis fraksi air.

Keterangan

Sampel

: fraksi air

ase diam

: selulosa

Fase gerak

: asam asetat 15%

Deteksi

: sinar UV 366 nm

sinar UV 366 nm dan uap amoniak

Jarak rambat

: 10 cm

Warna bercak :

bercak 1

: ungu tua

bercak 2

: fluoresensi biru muda

bercak 3

: hijau kuning

bercak 4 dan 5 : hijau kuning

bercak 6

: ungu tua keruh

bercak a dan b : tanwarna (tak berwarna)

Gambar 4. Kromatografi lapis tipis fraksi air.

Pengujian selanjutnya menggunakan KLT dua dimensi

dengan fase diam selulosa, fase gerak I TBA (t-butanol-asam

asetat-air 3:1:1 v/v) dan fase gerak II asam asetat 15% dengan

pembanding rutin. Hasil menunjukkan bahwa pada fraksi air

diidentifikasikan adanya senyawa flavonoid. Pada deteksi

dengan sinar UV 366 nm maupun sinar UV/nm dengan diberi

uap amoniak berwarna fluoresensi ungu terang serta harga Rf

0,81 (TBA) dan 0,61 (HOAc 15%) (Gambar 5).

Hasil kromatografi lapis tipis duA dimensi fraksi air.

Gambar 5. Kromatogram lapis tipis dua dimensi air dengan fase diam

selulosa dan fase gerak I. TBAA, fase gerak II. HOAc 15%.

Keterangan :

Deteksi

: sinar UV 366 nm

sinar UV 366 nm dengan uap NH3

Warna

: fluoresensi ungu terang

Harga Rf

: 0,81 (TBA); 0,61 (HOAc 15%)

Pembanding :

rutin

Ukuran lempeng : 20 x 20 cm

Tebal fase diam

: 0.25 mm

Pemisahan dan pengujian selanjutnya dengan melalui

KLT preparatif; sebagai fase diam selulosa dan fase gerak

asam asetat 15% yang merupakan fase-fase terpilih pada

penelitian ini. Hasil menunjukkan adanya enam zone (daerah)

yang terpisah dan berwarna ungu tua pada zone 2 berwarna

fluoresensi biru muda, zone 3 berwarna ungu floeresensi, zone

4 dan 5 berwarna hijau kuning dan zone 6 berwarna ungu tua

yang keruh, seperti yang terlihat pada Gambar 6.

Hasil kromatografi lapis tipis preparatif fraksi air.

Gambar 6. Kromatogram lapis tipis preparatif fraksi air dengan fase

diam selulosa dan fase gerak I. TBA, fase gerak II. HOAc

15%.

Keterangan :

Deteksi

: sinar UV 366 nm

sinar UV 366 nm dengan uap NH3

Warna zona :

Zona 1

: ungu tua

Zona 4 dan 5 : hijau kuning

Zona 2

: fluoresensi biru muda Zona 6

: ungu tua keruh

Zona 3

: ungu fluoresensi

Untuk mengetahui zona-zona yang aktif dalam meng-

hambat efek kontraksi trakea karena diinduksi histamin, maka

dilakukan uji farmakodinamik lanjutan. Hasil seperti terlihat

pada Tabel 2 dan Gambar 7a, 7b dan 7c.

Dari data dapat dibaca bahwa pada zona 2, 3, 4, 5 dan

zona 6 kesemuanya dapat menghambat efek kontraksi marmot

terisolir setelah diinduksi histamin, sedang untuk zona 1 mem-

beri efek potensiasi (memperkuat kontraksi).

Analisis selanjutnya yang lebih diutamakan adalah zona 2

dan zona 3 karena keduanya mempunyai kemampuan untuk

mengurangi efek kontraksi (dalam %) yang cukup besar

apabila dibandingkan dengan zona lainnya (Tabel 2).

Hasil uji farmakodinamik lanjut untuk zona 2 berturut-turut

adalah 34,15%, 36,68% dan 39,24% sedang untuk zona 3

berturut-turut adalah 67,51%, 70,21% dan 74,68% seperti

terlihat pada Tabel 3.

Cermin Dunia Kedokteran No. 128, 2000

Tabel 2. Pengurangan kontraksi maksimum dan pergeseran kurva

akibat induksi histamin setelah penambahan tiap-tiap zona

hasil KLT preparatif.

Jumlah zona yang

ditambahkan (mg)

(n = 4)

Pergeseran kurva

ke kanan

Pengurangan efek

kontraksi maksimum

(%)

Zona 1 : 9,49

18,98

Zona 2 : 6,09

12,19

Zona 3 : 36,30

72,60

Zona 4 : 0,81

8,06

Zona 5 : 3,87

7,74

Zona 6 : 56,82

113,65

0,22

0,57

-0,23

0,42

0,70

0,77

0,17

0,19

0,40

0,43

-0,27

3,38

-61,34

-50,18

62,34

66,34

64,09

65,66

34,23

52,49

36,85

36,92

47,07

57,34

· = kurva baku histamin (n=4)

° = 9,49 mg zona 1 (n=4)

x = 6,09 mg zona 2 (n=4)

x = 18,98 mg zona 1 (n=4)

° = 12,19 mg zona 2 (n=4)

Gambar 7a. Kurva hubungan antara log dosis (histamin) vs % efek

(kontraksi) dengan Perlakuan : (A) Zona 1; (B) Zona 2.

· = kurva baku histamin (n=4)

x = 36,30 mg zona 3 (n=4)

x = 0,81 mg zona 4 (n=4)

° = 72,60 mg zona 3 (n=4)

° = 8,06 mg zona 4 (n=4)

Gambar 7b. Kurva hubungan antara log dosis (histamin) vs. % efek

(kontraksi) dengan Perlakuan : (C) Zona 3; (D) Zona 4.

· = kurva baku histamin (n=4)

x = 3,87 mg zona 5 (n=4)

x = 56,82 mg zona 6 (n=4)

° = 7,74 mg zona 5 (n=4)

° = 113,65 mg zona 6 (n=4)

Gambar 7c. Kurva hubungan antara log dosis (histamin) vs % efek

(kontraksi) dengan Perlakuan : (E) Zona 5; (F) Zona 6.

Tabel 3. Pengurangan kontraksi maksimum dan pergeseran kurva

akibat induksi histamin setelah penambahan zona 2 dan 3 hasil

KLT preparatif.

Jumlah zona yang

ditambahkan (mg)

(n 4)

Pergeseran kurva

ke kanan

Pengurangan efek

kontraksi maksimum

(%)

Zona 2

: 0,61

1,23

2,46

Zona 3

: 3,63

7,26

14,52

0,12

0,15

0,19

0,90

0,93

0,98

34,15

36,68

39,24

67,51

70,21

74,68

Ternyata pada zona 3 mengandung komponen yang lebih

aktif dalam menghambat kontraksi trakea marmot terisolasi

apabila dibandingkan dengan zona 2, seperti terlihat pada

Tabel 3 dan Gambar 8. Atas dasar ini maka dilakukan analis-

is kandungan aktif yang terkandung dalam zona 3 dengan

menggunakan spektroskopi-UV. Hasil analisis seperti pada

Tabel 4 dan Gambar 9.

· = kurva baku histamin (n=4)

= kurva baku histamin (n=4)

= 0,61 mg zona 2 (n=4)

= 3,63 mg zona 3 (n=4)

° = 1,23 mg zona 2 (n=4)

° = 7,26 mg zona 3 (n=4)

x = 2,46 mg zona 2 (n=4)

x = 14,52 mg zona 3 (n=4)

Gambar 8. Kurva hubungan antara log dosis (histamin) vs % efek

(kontraksi) dengan perlakuan : (B) Zona 2; (C) Zona 3.

Tabel 4. Panjang gelombang (

) zona 3 yang diperoleh dari hasil KLT

preparatif fraksi air.

Panjang gelom-

bang maksimum

(nm) pita

Selisih Panjang

gelombang (nm)

pita

Pereaksi

diagnostik

I II I

Petunjuk penafsiran

MeOH

275

Flavon atau dihidro-

flavonol

NaOH

275

Tanpa OH bebas pada

cincin A, flavanon atau

dihidroflavonol tanpa

5,7-OH atau mungkin

tanpa 7-OH, flavanon

dengan 5-OH

A1C1

275

Tanpa 5-OH pada

cincin A

A1C1

/HCl 275

Tanpa o-diOH pada

cincin B dan tanpa o-

diOH pada cincin A

(6,7 atau 7,8)

NaOAc 275

324

- 0 - Tanpaa

o-diOH

3'4'

pada cincin B

NaOAc/H

275

324

Tanpa o-diOH pada

cincin A (6,7 atau 7,8)

Keterangan :

sh ='shoulder' = bahu = infleksi

zona 3 = isolat flavonoid

Cermin Dunia Kedokteran No. 128, 2000 29

DISKUSI

Pada preparat trakea marmot terdapat reseptor-reseptor

yang apabila dirangsang aksinya saling antagonis, reseptor-

reseptor tersebut secara garis besar dibagi menjadi dua

golongan, yaitu yang dapat merelaksasi dan mengkontraksi

trakea. Reseptor yang dapat mengkontraksi adalah reseptor

histaminik H

, adrenergik alfa dan kholinergik, sedang yang

dapat merelaksasi trakea adalah reseptor adrenergik beta

beta

, histaminik-H

, dan prostaglandin E (prostaglandin seri

(11)

. Untuk dapat melihat salah satu efek penghambatan dari

ekstrak kulit buah Citrus aurantifolia Swingle terhadap

kontraksi trakea yang disebabkan oleh reseptor histaminik-H

maka reseptor adrenergik beta

, dan beta

perlu dihambat

dengan propranolol 10

-6

M sedang reseptor histaminik-H

perlu dihambat dengan simetidin 10

-5

M; dengan demikian

diharapkan kerja ekstrak tersebut terhadap penghambatan

kontraksi trakea akan melalui reseptor histaminik-H

Untuk mengetahui komponen aktif dari zona 3 yang

mampu menghambat kontraksi trakea marmot terisolasi sete-

lah diinduksi histamin secara in vitro maka dilakukan analisis

dengan menggunakan spektroskopi-UV yang hasilnya dapat

dijelaskan sebagai berikut.

Bentuk spektra isolat (zona 3) dalam MeOH, ternyata

pada pita II mempunyai rentang serapan maksimum di antara

250-300 nm yang puncak serapan maksimumnya adalah 275

nm, sedang pada pita I tidak menunjukkan adanya puncak

serapan maksimum sama sekali. Bentuk spektra yang demi-

kian dimiliki oleh senyawa flavonoid golongan isoflavon,

dihidroflavonol dan flavanon. Hal ini karena ketiganya

Hasil analisis spektroskopi zona 3 (isolat) yang diperoleh dari

kromatografi lapis tipis preparatif fraksi air

Gb.16a. Spektrum UV dalam MeOH Gb. 16b. Spektrum UV dalam MeOH

dan MeOH+ NaOH

dalam MeOH + AlCl3 dan

MeOH + AlCl 3+ BCl

Gb. 16c. Spektra UV dalam MeOH dalam MeOH + NaOAc dan MeOH +

NaOAc + HgBO

Gambar 9. Hasil analisis spektrum ultraviolet isolat (zona 3) hasil KLT

preparatif fraksi air.

mempunyai bentuk spektrum yang serupa, yaitu pada pita II

mempunyai bentuk spektrum dengan intensitas serapan yang

sangat kuat, sedang pada pita I mempunyai intensitas serapan

yang lemah atau hanya berupa shoulder saja

(12)

. Selanjutnya,

rentang serapan maksimum isolat terletak di antara 245-270

nm, sedang rentang serapan maksimum dihidroflavonol dan

flavanon terletak di antara 270-290 nm pada pita II dan tidak

mempunyai serapan sama sekali pada pita I

(12)

. Hal ini karena,

baik pada dihidroflavonol maupun flavanon keduanya tidak

mempunyai ikatan rangkap di antara atom C

dan C

, sedang

perbedaannya terletak pada atom C

, yaitu pada flavanon atom

mengikat kedua atom H sedang pada dihidroflavonol atom

mengikat satu atom H dan satu gugus OH. Adanya

perbedaan pada atom C

ini menyebabkan adanya perbedaan

yang relatif kecil terhadap bentuk spektrumnya. Atas dasar ini

maka dapat diasumsikan bahwa isolat flavonoid tersebut me-

ngandung dihidroflavonol serta flavanon, dan bukan iso-

flavanon.

Pada penambahan NaOH yang merupakan basa kuat,

ternyata pada isolat flavonoid tidak mengalami perubahan

bentuk spektra baik pada pita II maupun pita I. Selanjutnya,

pita II dalam MeOH (275 nm) dan pita II dalam NaOH (275

nm), ternyata tidak mengalami pergeseran sama sekali. Atas

dasar ini maka dapat diasumsikan bahwa pada isolat tidak

mempunyai gugus OH pada cincin A dan mungkin pula

merupakan senyawa flavonoid golongan dihidroflavonol atau

flavanon yang tanpa 5,7-OH atau mungkin tanpa 7-OH dan

mungkin juga merupakan flavanon dengan gugus 5-OH.

Dengan tidak terjadinya perubahan bentuk spektrum pada pita

I maka dapat diasumsikan bahwa pada isolat flavonoid tidak

mempunyai gugus o-diOH pada posisi 3',4' dari cincin B.

Penambahan AlCl

, ternyata juga tidak mengubah per-

Cermin Dunia Kedokteran No. 128, 2000

geseran pada pita II, sehingga dapat diasumsikan bahwa pada

isolat flavonoid tidak mempunyai gugus 5-OH pada cincin A.

Penambahan HCl ke dalam isolat flavonoid yang telah

berisi AlCl

, ternyata juga tidak menyebabkan pergeseran

sama sekali. Atas dasar ini maka pada isolat flavonoid dapat

diasumsikan tidak mempunyai gugus o-diOH pada cincin A

6,7

atau C

7,8

) dari pita II.

Pengaruh NaOAc ternyata dengan membandingkan

bentuk spektrum pada pita II dalam MeOH dengan pita II

NaOAc yang keduanya mempunyai puncak serapan mak-

simum yang sama yaitu 275 nm. Hal ini berarti juga tidak

mengalami pergeseran sama sekali dan hanya menunjukkan

adanya shoulder yang lemah sekali dengan panjang gelom-

bang 334

nm pada pita I. Atas dasar ini maka dapat

diasumsikan bahwa isolat flavonoid tidak mempunyai gugus

7-OH bebas pada cincin A.

Penambahan H

ke dalam isolat flavonoid yang telah

berisi NaOAc, ternyata juga tidak menyebabkan adanya per-

geseran sama sekali dan hanya menunjukkan adanya shoulder

yang lemah sekali dengan panjang gelombang 334

nm pada

pita I. Sejanjutnya, dengan membandingkan pita I dalam

MeOH (275 nm) dengan pita I dalam NaOAc/H

(275 nm)

ternyata juga tidak mengalami pergeseran sama sekali. Atas

dasar ini maka isolat flavonoid tersebut dapat diasumsikan

tidak mempunyai gugus o-diOH pada cincin A (C

6,7

atau C

7,8

Atas dasar serangkaian analisis spektrum ultraviolet ter-

hadap komponen aktif yang terkandung di dalam isolat

flavonoid untuk selanjutnya lebih menjurus ke arah adanya

senyawa flavonoid ini golongan flavanon. Kecenderungan

tersebut tidak didasari atas alasan-alasan berikut di bawah ini.

Alasan pertama, dengan memperhatikan data spektrum

ultraviolet tersebut telah diperoleh kenyataan yang menunjuk-

kan adanya puncak serapan maksimum 175 nm pada pita II

sementara tidak menunjukkan puncak serapan maksimum

sama sekali atau hanya berupa shoulder dengan intensitas

serapan yang sangat lemah pada pita I (Gambar 9), sehingga

pada asumsinya lebih mengarah pada adanya flavanon. Hal ini

sesuai dengan pemyataan Mabry et al,

(12)

bahwa rentang

serapan maksimum dari flavanon terletak di antara 270-295

nm pada pita II. Bahkan menurut Harbone

(13)

panjang

gelombang maksimum utama flavanon mempunyai rentang

serapan maksimum pada 275-278 nm pada pita II, sedang

pada pita I berupa shoulder atau merupakan puncak serapan

yang sangat lemah sekali intensitasnya pada panjang

gelombang di atas 300 nm.

Alasan kedua, pada umumnya senyawa flavonoid banyak

tersebar pada tanaman, akan tetapi untuk flavanon tidak

demikian

(14)

. Karena merupakan golongan `flavonoid minor'

yang berarti flavonoid dengan pola penyebaran terbatas.

Namun demikian, meskipun terdapat dalarn jumlah terbatas

ternyata flavanon lebih banyak tertumpuk di dalam kulit buah

Citrus sp.

(5,8)

dan merupakan senyawa pahit yang mudah larut

di dalam air berupa glikosida dan sedikit sekali yang berupa

aglikon

(13)

Alasan ketiga, pada penyebaran senyawa flavonoid secara

taksonomi dalam tanaman menunjukkan adanya kecenderung-

an yang kuat dan berhubungan sangat erat

(15)

. Artinya, dalam

dunia tumbuhan yang secara taksonomi mempunyai hubungan

erat maka akan menghasilkan senyawa flavonoid pada

tumbuhan lain yang sistematikanya sama. Sistematika untuk

tumbuhan Citrus aurantifolia Swingle akan sama dengan

sistematika tumbuhan Citrus sp. pada umumnya, yang ke-

semuanya termasuk divisio Spematophyta, subdivisio Angios-

permae, familia Rutaceae serta genus Citrus

(1,2,8,12,13,15,17)

. Hal

ini serupa dengan pernyataan dari Geissman

(18)

, senyawa

flavanon golongan flaavanon selain terdapat di dalam kulit

buah Citrus aurantifolia Swingle maka terdapat juga di dalam

kulit buah Citrus nobilis, penelitian yang sama telah menemu-

kan pula adanya senyawa flavonoid golongan flavanon pada

kulit buah Citrus sp yang lain

(7,8,9)

Mekanisme ekstrak kulit buah Citrus aurantifolia Swingle

yang dapat menghambat efek kontraksi trakea marmot

terisolasi yang diinduksi histamin secara in vitro dapat melalui

beberapa kemungkinan, yang antara lain seperti dijelaskan

berikut ini.

Kemungkinan pertama, antagonis yang terkandung di

dalam kulit buah Citrus aurantifolia Swingle dan agonis

(histamin) berikatan dengan reseptor yang sama, sehingga

terjadi antagonisme kompetitif, untuk dapat menimbulkan efek

yang sama maka agonis berikatan dengan reseptor yang sama.

Selanjutnya untuk menimbulkan efek maka agonis harus

berinteraksi dengan reseptornya dan efek maksimum diperoleh

apabila semua reseptornya diduduki agonis. Dengan adanya

antagonis maka agonis untuk dapat memperoleh efek yang

sama memerlukan dosis yang lebih besar sehingga kurva

bergeser ke kanan (Gambar 7a dan 8), akan tetapi dalam

kurva tersebut ditunjukkan juga bahwa dengan memperbesar

dosis antagonis maka akan memperkecil efek agonis. Hal ini

ditunjukkan dengan terjadinya pengurangan efek kontraksi

maksimum dan pengurangan efek ini tidak bisa diatasi dengan

memperbesar dosis agonis (histamin), keadaan yang demikian

mencirikan terjadinya antagonis non-kompetitif. Atas dasar ini

maka kerja dari antagonis yang terkandung di dalam kulit

buah Citrus aurantifolia Swingle dan agonis (histamin) me-

lalui perpaduan antara antagonisme kompetitif dan non-

kompetitif.

Kemungkinan kedua, oleh karena di dalam trakea marmot

reseptor prostaglandin E yang mempunyai aksi meningkatkan

kadar siklit-adenosa mono pospat (c-AMP) sehingga me-

nyebabkan relaksasi yang dalam kerjanya berhubungan

dengan reseptor adrenergik beta, maka dengan naiknya kadar

siklik-AMP akan dapat menghambat produksi histamin lebih

lanjut

(18,19,20)

. Produksi dan pelepasan histamin terjadi karena

adanya degranulasi mastosit (mast-cells)

(20)

. Aksi dari reseptor

prostaglandin E yang demikian ini terlihat pada waktu trakea

terisolasi tersebut sebelum diinduksi dengan histamin terlebih

dahulu diberi ekstrak kulit buah Citrus aurantifolia Swingle

sehingga terjadi relaksasi (Gambar 10). Namun demikian

perlu diketahui bahwa prostaglandin E mempunyai waktu

paruh yang pendek

(21)

, sehingga kemungkinan terjadi interaksi

antara prostaglandin E dengan reseptornya sangat kecil sekali.

Jadi dapat diperkirakan bahwa efek pengurangan kontraksi

trakea melalui prostaglandin E tersebut relatif kecil sekali

sehingga dapat diabaikan.

Cermin Dunia Kedokteran No. 128, 2000 31

SARAN

1) Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai mekanis-

me efek penghambatan kontraksi trakea marmot, terisolasi

yang diinduksi histamin secara in vitro dengan adanya

senyawa aktif yang terkandung di dalam zona 3 hasil KLT

fraksi air.

2) Perlu dilakukan elusidasi struktur lebih lanjut terhadap

zona 3.

KEPUSTAKAAN

1. Pulle A.A. Compendium van der Terminologie Nomenclatuur en

Systematiek der Zaadplanten, N.V.A. Oosthoek's Uitg. Mij., Utrecht,

1952.

Sastroamidjojo S. Obat Aseli Indonesia, Dian Rakjat, Djakarta, 1952.

3. Anonim, Indeks Tumbuh-tumbuhan di Indonesia, P.T. Eisal, Jakarta,

1986.

Gambar 10. Hasil rekaman relaksasi trakea terisolasi yang disebabkan

oleh reseptor prostaglandin E setelah penambahan ekstrak

kulit buah Citrus aurantifolia Swingle.

Anonim, Tanaman Obat Indonesia, Jilid I, Dep. Kes. R.I., Jakarta, 1985.

5. Harborne J.B. Phytochemical Methods, Champman and Hall, London,

1973; p. 52-9.

Trease Evans, Pharmacognosy, Bailliere Tindall, 11

ed., London 1978;

p. 409.

KESIMPULAN

1) Kontraksi trakea marmot terisolasi yang diinduksi his-

tamin dapat dihambat oleh ekstrak kulit buah Citrus

aurantifolia Swingle secara in vitro.

Amellal M. Inhibitor of Mast-cell Histamine Release by Flavonoids and

Biflavonoids, Planta Medica 1985; 16-9.

8. Middleton E. The Flavonoids, Trends in Pharmacological Sciences

1984; (August.) : 335-8.

Kontraksi trakea marmot terisolasi yang diinduksi

histamin dapat dihambat oleh fraksi air dari ekstrak kulit buah

Citrus aurantifolia Swingle.

9. Sankawa U. Antiallergic Substances from Chinese Medical Plants,

Internati Symp on Chinese Medical Materials Research, Hongkong,

1984; p. 29.

10. Timmerman H, Sceffer N.G. A New Tracheal Strip Preparation for the

Evaluation of Beta-adrenergic Activity, Pharm J., 1968; 20 : 78-9.

3) Hasil KLT preparatif fraksi air dengan menggunakan fase

diam selulosa dan fase gerak HOAc 15% menunjukkan enam

buah zona.

11. Soepono S. Aspek Neurofisiologik Asma Bronkiaal, Simposium RSUP

DR. Sardjito, Yogyakarta, 1985.

4) Dari keenam zona tersebut, ternyata zona 3 paling aktif

dalam menghambat kontraksi trakea marmot terisolasi yang

diinduksi histamin secara in vitro.

12. Mabry TJ., Markham KR., Thomas MB. The Systematic Identification

of Flavonoids, Springer Verlag, Berlin, New York, 1970; p. 165-74.

13. Harborne JB. Metode Fitokimia, Edisi II. ITB, Bandung, 1987.

14. Horowitz W. Official Methods of Analysis of The Association of

Official Agricultural Chemists, AOAC, Washington DC. 1865; p. 341.

5) Senyawa yang terkandung di dalam zona 3 (isolat) me-

rupana senyawa flavonoid golongan flavanon atau turunannya

dengan struktur umum sebagai berikut :

15. Markham KR. Cara Mengidentifikasi Flavonoid, (Terjemahan), ITB,

Bandung 1988, hal. 1-53.

16. Sugeng. Tanaman Apotik Hidup (Jamu-jamu Tradisional), C.V Aneka

Ilmu, Semarang, 1984, hal. 89-90.

17. Geissman. The Chemistry of Flavonoid Compounds, Dept. of

Chemistry, University of California, Los Angeles, The Macmillan

Company, New York.

18. Kuzemko JA. Asthma pada Anak, Yayasan Essentia Medica, Jakarta,

1972, p. 11-3.

19. Frick OL. Fundenberg, Stites DP. Cadwell JL. Well eds. Immediate

Hypersensitivity, Basic and Clinical Immunology, 3

ed., Los Altos,

California; Lange Medi p. 274-95.

20. Crofton SJ. Douglas A. Respiratory Disease, 3

ed., Blacwell Scient

Publ, Osney, Mead, Oxford, 1983; p. 278-508.

21. Burgen ASV. Mitchell JR Gaddum's Pharmacology, Oxford University

Oxford, 3

ed., 1983.

Everything is as you take it

Cermin Dunia Kedokteran No. 128, 2000