Cermin Dunia Kedokteran

HASIL PENELITIAN

Perbandingan Hasil Uji Coba

ELISA Makro

pada Penderita Tuberkulosis Paru

Biakan Positif dan Negatif

Anik Widijanti

Instalasi Patologi Klinik RSUD Dr Sa Anwar/Fakultas Kedokteran Universitas Brawidjaja, Malang

ABSTRAK

Penelitian dilakukan pada 61 sera penderita tuberkulosis paru, 35 sera dengan biakan

dahak positif dan 26 dengan biakan dahak negatif. Pada sera ditentukan kadar IgG

spesfiknya terhadap M. tuberculosis dengan cara Elisa makro.

Hasil yang diperoleh menunjukkan bahwa kadar IgG spesifik pada penderita dengan

biakan positif secara bermakna lebih kecil dari kadar IgG spesifik penderita dengan

biakan negatif (p < 0,05).

PENDAHULUAN

Penyakit tuberkulosis (TB) masih merupakan masalah ke-

sehatan masyarakat di Indonesia

(1)

. Berdasarkan program pem-

berantasan penyakit TB di Indonesia maka pengobatan ditentu-

kan dengan adanya kuman di dalam dahak

(2)

. Hal tersebut ber-

dasar padapertithbangan bahwapemeriksaan dahak mikroskopis

yang positif lebih mempunyai arti epidemiologi dibandingkan

dengan biakan yang positif. Untuk mendapatkan hasil positif

pada pemeriksaan mikroskopik dibutuhkan 500010000 kuman

per ml dahak, sedangkan untuk biakan yang positif hanya dibu-

tuhkan 2550 kuman per ml dahak

(3)

. Pemeriksaan mikroskopik

yang positif belum tentu menunjukkan kuman hidup, tetapi biak-

an yang positif selalu disebabkan adanya kuman hidup, hanya

sayangnyapemeriksaan biakan selain membutuhkan waktu lama

(12 bulan) juga relatif lebih mahal

(4)

. Adanya kuman dalam

dahak, dapat memberikan hasil biakan negatif bila kumannya

mati. Dengan kenyataan tersebut maka seharusnya penderita

dengan kuman mati akan mempunyai kadar IgG yang berbeda

dan penderita yang biakannya positif (kuman hidup). Kadar IgG

spesifik terhadap M. tuberculosis sering meningkat sesudah pen-

derita TB mendapatkan pengobatan dan akan normal kembali

pada 23 bulan sesudah pengobatan dihentikan, serta akan

meningkat lagi jika terjadi kekambuhan

(1)

Kadar IgG spesifik terhadap M. tuberculosis pada penderita

dapatjuga dapat ditentukan dengan cara Elisa makro. Sensitivi-

tas, detektabilitas dan presisi Elisa makro lebih baik dibanding-

kan dengan Elisa mikro, tetapi Elisa makro harganya relatif

mahal dan lebih cocok untuk jumlah sampel yang kecil

(5)

Dalam penelitian ini akan diperiksa apakah ada perbedaan

hasil Elisa makro antara biakan positif dan biakan negatif.

MATERIAL DAN METODE

Sampel diambil dari 61 penderita TB Paru dengan kriteria:

1) BTA dahak (mikroskopik) yang positif (Ziehi Nielsen)

2) Kelainan radiologis yang relevan untuk TB Paru

3) Belum pernah mendapat pengobatan anti TB (wawancara

cermat)

4) Keadaan umum baik, serta tidak minum obat yang dapat

menekan imunitas humoral.

Cara pelaksanaan:

1) Dilakukan pemeriksaan biakan dahak.

2) Pemeriksaan kadar IgG dengan cara Elisa makro dilakukan

Cermin Dunia Kedokteran No. 115, 1997 27

seperti pada Elisa mikro cara Kardjito dkk, hanya digunakan

tabung polistiren dan volumenya 3 kali lebih besar

(5,6)

Ke dalam tabung polistiren dimasukkan 0,6 ml antigen

sitoplasmik dan Mycobacterium tuberculosis var bovis BCG

(Ultrasonicated) pengenceran 1: 100 dan diinkubasikan dalam

kotak lembab pada 4°C selama semalam. Kemudian tabung

polistiren dicuci dengan larutan dapar fosfat salin tween (PBS

tween) sebanyak 3 kali. Sesudah itu ditambahkan 0,6 ml serum

(pengenceran 1: 500) dan diinkubasikan selama 2jam pada

suhu kamar, kemudaian dicuci seperti di atas.

Berikutnya ditambahkan 0,6 ml konyugat (antihuman IgG

berlabel ensim peroksidase) dengan pengenceran 1 : 1000, di-

inkubasi semalam pada 4°C. Sesudah inkubasi sisanya dibuang

dan tabung dicuci seperti di atas.

Selanjutnya dimasukkan 0,6 ml substrat (H

0,03% dan

ABTS), inkubasi 30 menit. Tambahkan 0,150 ml NaF 1 N

sebagai larutan penghenti reaksi. Pembacaan dilakukan pada

spektrofotometer dengan panjang gelombang 420 nm

(5,6)

Dalam tiap seri pemeriksaan dipakai serum kontrol yang

sama, yang juga berguna untuk menghitung CV antar seri (between

run) dan dalam 1 seri (intra run).

3) Penentuan batas atas nilai rujukan (cut off) pemeriksaan

dilakukan dengan memeriksa 34 perawat sehat, dan dipakai

rumus:

Cut off = mean + 2 SD

Cut off dipakai untuk membedakan hasil positif dan negatif

dan Elisa makro. Nilai absorbance di atas cut off menunjukkan

hasil positif, sedangkan nilai absorbance di bawah nilai cut off

menunjukkan hasil negatif.

4) Perhitungan CV (koefisien variasi) dan Elisa makro dengan

Rumus : =

Mean

Pengaruh CV terhadap sensitifitas tes diperbandingkan pada

kedua kelompok biakan.

5) Untuk membandingkan kadar IgG spesifik antara 2 kelom-

pok biakan positif dan negatif dipakai uji statistik Student t

(7)

6) Penentuan sensitifitas pemeriksaan dengan rumus:

jumlah penderita dengan Elisa makro positit

jumlah penderita Tb dalam penelitian

7) Perbedaan sensitifitas (nilai diagnostik) uji Elisa makro dari

kedua kelompok biakan positif dan negatif dihitung dengan uji

statistik McNemar

(8)

HASIL

1) Pemeriksaan Elisa makio pada 34 perawat sehat.

Cut Off pemeriksaan =

0,574 absorbance unit

Mean (nilai rata-rata) = 0,300

SD (simpangan baku) = 0,137

CV (koefisien variasi) between run = 28,77%

within run = 16,11%

2) Untuk mengetahui pengaruh besarnya CV terhadap sensiti-

fitas (nilai diagnostik) pada Elisa makro, maka dilakukan per-

hitungan berbagai cut off:

Cut off 28,77% lebih besar mean + 2 SD : 0,739

Cut off 28,77% lebihiecil mean + 2 SD : 0,409

Cut off dengan mean + 3 SD : 0,7 11

Tabel 1. Hasil Elisa makro pada penderita TB Paru baru

Biakan positif

Biakan negatif

Jumlah kasus

Mean War IgG spesifik

1,094

1,385

SD 0,560

0,463

Rentang 0,160-1,800

0,180-1,810

Sensitifitas 80%

92,30%

Perbedaan bermakna

p < 0,05

Tabel 2. Hasil sensitifitas Elisa Makro dengan berbagal batas alas

nilai

rujukan

Cut off

value

Dahak positif

N=61

Biakan positif

N=35

Biakan negatif

N=36

0,409 86,88% 82,85% 92,30%

0,574 *

85,24 % *

80,00 % *

92,30 % *

0,739 80,32% 71,42% 92,30%

0,711 80,32% 71,42% 92,30%

Keterangan:

* Batas atas nilai rujukan dengan rumus mean + 2 SD (lama). Tidak

terdapat perbedaan yang bermakna antara sensitifitas dengan batas

atas nilai rujukan baru dan lama (p > 0,05).

PEMBAHASAN

Penderita tuberkulosis (TB) yang mendapat pengobatan,

kadar IgG spesifiknya akan meningkat dan mencapai puncaknya

pada 3 bulan pengobatan, kemudian akan menurun lagi secara

perlahan dan mencapai kadar orang normal pada 3 bulan sesudah

pengobatan dihentikan, serta akan meningkat lagi jika terjadi

kekambuhan (relaps)

(1)

. Pengobatan yang diberikan kepada

penderita juga dapat menyebabkan perubahan pengeluaran

kuman hidup dalam dahak menjadi kuman yang mati (dahak

mikroskopik positif tetapi biakan negatif). Hal tersebut dapat

dilihat dari data kami: dari 61 penderita dengan dahak mikro-

skopikpositif hanya 35 yang menunjukkan biakan positif. Keada-

an tersebut dapat terjadi karena pemilihan kasus TB paru hanya

berdasar pada wawancara, sehingga sering terjadi kesalahan

apakah benar-benar kasus baru (yang belum pernah mendapat

pengobatan) atau kasus yang sudah pernah diobati.

Dari kenyataan di atas maka kadar IgG spesifik pada pen-

derita yang menunjukkan biakan positif (masih mengeluarkan

kuman hidup dalam dahaknya) lebih rendah dibandingkan

dengan penderita yang mengeluarkan kuman mati (biakan ne-

gatif), karena mungkin sudah mendapatkan pengobatan. Hasil

penentuan kadar IgG spesifik dengan Elisa makro menunjukkan

seperti yang diperkirakan, yaitu kadar IgG spesifik pada kelom-

pok dengan biakan positif lebih rendah dari kelompok dengan

biakan negatif (p <0,05). TB dengan dahak mengandung kuman

hidup (biakan positif) mempunya kadar IgG spesifik lebih

rendah karena penderita tersebut mempunyai antigen yang ber-

lebihan. Antigen yang berlebihan dapat menekan respon imun-

humoral dan menyebabkan rendahnya kadar IgG spesifik

(9)

. Di

samping itu antigen berlebihan juga akan mengikat antibodi

dalam sirkulasi, kemudian membentuk kompleks imun dengan

Cermin Dunia Kedokteran No. 115, 1997

akibat turunnya kadar IgG spesifik dalam darah

(10)

Perubahan batas atas nilai rujukan (cut off) dengan memper-

hitungkan CV, ternyata tidak mempengaruhi sensitifitas (nilai

diagnostik) dan uji Elisa makro (p > 0,05). Hal ini sangat

menguntungkan karena besarnya CV ternyata tidak berpengaruh

pada nilai diagnostik uji Elisa makro, sedangkan kegunaan uji

Elisa makro untuk evaluasi tindak lanjut masih memerlukan

penelitian lebih lanjut.

KESIMPULAN

Penentuan kadar IgG spesifik pada Elisa makro menunjuk-

kan:

1) Kadar IgG spesifik pada kelompok dengan biakan positif

lebih rendah dibanding kadar IgG spesifik pada kelompok de-

ngan biakan negatif (p <0,05).

2) Perubahan batas atas nilai rujukan dengan memperhitung-

kan CV dan pemakaian rumus cut off = mean + 3 SD ternyata

tidak mempengaruhi sensitifitas (nilai diagnostik) dan uji Elisa

makro (p > 0,05).

KEPUSTAKAAN

1. Handojo I. Uji Peroksidase-Antiperoksidase (PAP pada Penyakit Tu-

berkulosis Paru (Disertation) Surabaya, Indonesia: Universitas Airlangga

Surabaya, 1988. 213 p.

2. Ditjen P3M Depkes RI. Rencana Induk Pemberantasan Penyakit Tu

berkulosis Paru di Indonesia. Surabaya; Konggres PPTI ke III, September

1984.4769.

3. Handojo RA. Review Hasil-hasil Penelitian mengenai Tuberkulosis Paru.

Laporan kepada Kepala Badan Penelitian & Pengembangan Kesehatan,

Depkes RI. Balai Pemberantasan Penyakit Paru-paru (BP4) Malang 1978.

4. Koneman EW dkk. Color Atlas and Textbook of Diagnostic Micro

biology. 3rd ed. JB Lippincott Co USA 1988 535°572.

5. Anik W, Handoyo I. Nilai Diagnostik Uji Elisa Makro pada Penyakit

Tuberkulosis Paru (Kaiya akhir di bagian Patologi Klinik FK) Surabaya,

Indonesia: Universitas Airlangga Surabaya, 1990.

6. Handoyo I, Anik W. Nilai Klinis Uji Elisa Makro pada Penyakit Tu-

berkulosis Paru. Cermin Dunia Kedokt 1993; 88: 4548.

7. Sutrisno Hadi. Statistik Jilid 2. 9th ed. Yayasan Penerbitan Fakultas

Psikologi UGM Jogyakarta 1987 256284.

8. Sidney Siegel. Statistik Non Parametrik untuk ilmu-ilmu sosial. 2nd ed.

Gramedia Jakarta Indonesia 1986 : 7781.

9. Chaparas SD. Immunity in Tuberculosis. Bull WHO 1982; 60(4): 447

462.

10. Bhattacharya A, Ranadive SN, Kale M, Bhattacharya S. Antibody-Based

Enzyme-Linked Immunosorbent Assay for Determination of Immune

Complexes in Clinical Tuberculosis. Am Rev Respir Dis; 134: 205209.

Cermin Dunia Kedokteran No. 115, 1997 29