Cermin Dunia Kedokteran

HASIL PENELITIAN

Efek Antibakteri

Ekstrak Biji Pinang (Areca catechu)

terhadap S.aureus dan Ecoli in vitro

Imam Masduki

Laboratorium Mikrobiologi Fakultas Kedókteran,

Universitas Gajah Mada, Yogyakarta

PENDAHULUAN

Telah dilakukan uji preklinik manfaat bahan alam untuk

pengobatan cacing Nematoda usus dengan ekstrak biji pinang

(Areca catechu)

(1)

. Disebutkan pula bahwa biji digunakan oleh

masyarakat sebagai obat cacing, untuk memperkecil pupil, obat

luka, obat batuk, peluruh haid, peluruh liur dan penge1at

(2)

Buah pinang (Areca catechu) dapat memurnikan gusi dan

gigi. Serbuknya dapat membuang wolf dan gigi

(3)

Di Jawa buah pinang (Areca catechu) ditumbuk halus

digunakan untuk menyembuhkan luka, baik pada manusia

maupun pada hewan

(3)

. Di Lampung, setelah dicampur dengan

madu dan telur buah pinang digunakan untuk mengobati im-

potensi

(4)

. Di masyarakat Jambi pinang digunakan untuk

pengobatan kudis

(4)

Biji pinang (Areca catechu) mengandung senyawa tanin,

dan beberapa alkaloid seperti arekolin, guavasin, guakolin,

arekain

(5)

. Larutan tanin dapat digunakan untuk proses penya-

ABSTRAK

Biji pinang (Areca catechu) sebagai salah satu obat tradisional, di Jawa digunakan

sebagai obat luka dari di Jambi sebagai obat kudis. Menurut Depkes (1983), biji pinang

digunakan sebagai : obat cacing, obat luka, obat batuk, peluruh haid, dan memperkecil

pupil. Biji pinang mengandung senyawa tanin yang mempunyai daya antiseptik.

Dengan menggunakan teknik difusi sumuran Kirby Bauer dan Macro Broth Dilution

dilakukan uji daya antibakteri sediaan ekstrak dan infusa biji pinang terhadap S. aureus

dan E. coli. Ekstrak dan infusa dibuat sesuai dengan yang termaktub dalam Farmakope

Indonesia Sedangkan sediaan S. aureus dan E. coli. diambil dan galur murni koleksi

Laboratorium Mikrobiologi FK UGM.

Pada uji antibakteri dengan teknik difusi sumuran Kirby Bauer didapatkan diameter

hambatan rata-rata sediaan infusa 20 g% adalah 8,33 mm sedang sediaan ekstrak 6 mm

terhadap S.aureus. Dilakukan uji t-tes dengan a= 0,05, t tabel 2,132 sedangkan t hitung

adalah 3,50 dengan nilai probabilitas 0,0124 saehingga dapat dikatakan terdapat per-

beda yang bermakna antara diameter hambatan sediaan infusa dan ekstrak biji pinang

20 g% terhadap S. aureus. Sedangkan terhadap E. coli tidak terjadi zone hambatan.

Pada uji dengan teknik Macro Broth Dilution diperoleh MIC rata-rata sediaan infusa

adalah 1,25 g%, sedangkan sediaan ekstrak adalah 2,08 g% terhadap S. aureus. Dengan

menggunakan kepercayaan 90% didapatkan perbedaan yang bermakna antara dua kon-

sentrasi tersebut karena t tabel pada kepercayaan tersebut adalah 1,533 sedang t

hitungnya 2,00 dengan nilai P = 0,0581. Dengan E. coli tidak didapat MICnya.

Cermin Dunia Kedokteran No. 109, 1996 21

makan. Tanin tidak hanya berefek untuk pengelat tapi juga di-

gunakan untuk perlindungan karena mempunyai daya antiseptik.

Tanin digunakan juga untuk pengobatan luka bakar dengan cara

mempresipitasikan protein dan karena ada daya antibakterinya

(6)

Pinang (Areca catechu)

Termasuk divisi : Spermatophyta, sub divisi Angiosper-

mae, kelas : Monocolyledone, bangsa : Arcales, suku : Palmae,

arga : Areca, Jenis : Areca catechu.

Kandungan zat kimianya adalah sejumlah alkaloid turunan

yuridin yaitu arekolin (arecaidine methyl ester), dan guvakoline

(guvacine methyl ester). total alkaloid berkisar di atas 1,45%.

Arekolin merupakan alkaloid yang paling aktif. Areca juga berisi

tanin sekitar 15%

(5)

Staphylococcus aureus

Staphylococcus aureus adalah bakteri gram positip tidak

bergerak, ditemukan satu-satu, berpasangan, berantai pendek

atau bergerombol, tidak membentuk spora, tidak berkapsul

(7,8)

Dinding sel mengandung dua komponen utarna yaitu pepti-

doglikan dan asam teikhoar. Melakukan metabolisme secara

aerob dan anerob, katalase positip, membentuk asam dan kar-

bohidrat tanpa gas

(7)

Escherichia coli

Escherichia coli adalah bakteri batang pendek gram negatif

dengan ukuran 1,1 - 1,5 um x 2- 6 um, kadang-kadang berbentuk

oval bulat, tersusun tunggal atau berpasangan. Banyak galur

mempunyai kapsul atau mikrokapsul. Dapat bersifat motil maupun

non motil. Bersifat fakulatif anearob yang mempunyai tipe meta-

bolisme respirasi maupun fermentasi

(9)

E. coli tumbuh optimal pada suhu 37°C, membentuk koloni

bulat konveks dengan pinggir yang nyata. Pada media Mc Con-

key koloni berwarna merah jambu karena ada peragian

laktosa

(8,10)

HIPOTESIS

1) Ekstrak biji pinang (Areca catechu) mampu menghambat

atau membunuh kuman Staphylococcus aureus.

2) Ekstrak biji pinang (Areca catechu) mampu menghambat

atau membunuh bakteri Escherichia coli.

3) Sediaan ekstrak dan infusa. mempunyai kemampuan yang

berbeda dalam menghambat/membunuh kuman.

CARA PENELITIAN

1) Subyek yang diteliti

Ekstrak pinang (Areca catechu)

Ekstrak pinang diambil dari biji pinang yang tumbuh di

halaman Gelanggang Mahasiswa Universitas Gajah Mada. Ekstrak

pinang dibuat dengan cara menghancurkan biji yang sudah

kering. Ke dalam 10 g serbuk kering ditambahkan air dingin

sebanyak 45 ml, kemudian dikocok dalam erlenmeyer; setelah kira-

kira serbuk larut; tuangkan ke dalam tabung yang steril; maka

akan didapatkan konsentrasi ekstrak sebesar 20 g%. Tahap

berikutnya, melakukan uji terhadap BHI agar, bila tumbuh spora

atau kuman, berarti zat tersebut tidak steril. Untuk itu dilakukan

penyaringan dengan saringan bakteri yang terbuat dari selulosa

asetat. Kemudian dilakukan penanaman lagi pada media MH;

jika hasilnya sudah steril, ekstrak slap digunakan.

Infusa pinang (Areca catechu)

Infus biji pinang dibuat hampir sama dengan pembuatan

ekstrak. Bedanya ialah pada pembuatan infusa ini setelah serbuk

dicampurkan dengan air dingin dilakukan pemanasan pada suhu

90°C selama 15 menit. Kemudian dilakukan penyaringan dan uji

sterilitas dengan BHI seperti pada pembuatan ekstrak tersebut di

atas.

Bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli

Kuman yang dipakai pada penelitian ini terdiri dari dua

kuman hasil isolasi galur murni dan bukan kuman yang multi

resisten. Sediaan kuman ini merupakan kuman standar untuk tes

antibakteri yang mewakili dua kelompok kuman yaitu kelompok

kuman gram positip dengan wakilnya S.aureus dan gram negatip

dengan wakilnya E. coli. S. aureus yang dipakai adalah S. aureus

ATCC 25923 sedang E. coli yang dipakai adalah E. coli ATCC

295222. Sebelumnya, kedua kuman tersebut ditumbuhkan dulu

pada media agar darah untuk S. aureus dan Mc. Conkey untuk E.

coli. Dan koloni yang tumbuh dipilih koloni yang baik, kemu-

dian kuman dalam BHI ini diambil, diencerkan dengan NaC1

untuk memperoleh jumlah kuman yang sesuai dengan standar

Brown yaitu 10

cfu/ml. Selanjutnya kuman siap digunakan.

2) Cara kerja

a) Den gan difusi sumuran cara Kirby Bauer

Setelah kuman dioleskan pada media MH (Muller Hinton

Agar) dengan kapas lidi, bahan uji yang terdiri dari infusa pinang

20 g% dan ekstrak 20 g% diteteskan sebanyak 50 ul pada media

MH tersebut yang telah dibuat sumuran dengan diameter 5 mm.

Selanjutnya diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37°C dan

selanjutnya dilakukan pembacaan hasil.

b) Den gan teknik Macro Broth Dilution

Sebanyak 12 tabung 5 ml, masing-masing diisi akuades 1 ml

kecuali tabung ke-1 dan ke-11. Dimasukkan pula 1 ml sediaan

infusa 20 g% dan sediaan ekstrak 20 g% pada tabung ke- 1 dan 2

dan ke-l1. Jadi sekarang tabung ke-l berisi 1 ml bahan uji dan

tabung ke-2 berisi 2 ml bahan uji dengan konsentrasi sete-

ngahnya. Ambil satu ml bahan uji pada tabung ke-2 dan dimasuk-

kan ke dalam tabung ke-3, lalu tambahkan 1 ml akuades dan dari

tabung ke-3, diambil 1 ml dimasukkan ke tabung ke-4. Demikian

seterusnya, sehingga didapatkan pengenceran secara serial

menjadi setengah konsentrasi mula-mula, tabung ke- 1 konsen-

trasinya 10 g%, tabung ke-2 konsentrasinya 5 g%, tabung ke-3

konsentrasinya 2,5 g% dan selanjutnya konsentrasi dibuat menjadi

setengahnya dengan cara memindahkan 1 ml tabung ke-2 dalam

tabung berikutnya. Tabung ke-12 hanya diisi akuades 1 ml saja.

Kemudian kuman 10

cfu/ml diencerkan pada media BHI se-

hingga dipenoleh konsentrasi kuman dalam media BHI ini

sebesar 106 cfu/ml. Dan pengenceran ini diambil dan dimasuk-

kan masing-masing 1 ml ke dalam tabung ke- 1 sampai ke- 12,

Cermin Dunia Kedokteran No. 109, 1996

kecuali tabung ke- 11 yang hanya mangandung BHI tanpa kuman

sebagai kontrol sterilitas bahan, sedang tabung ke- 12 mengan-

dung kuman dalam akuades sebagai kontrol pertumbuhan kuman.

Kemudian diinkubasi 24 jam pada suhu 37°C. Jadi, tabung 1

berisi 1 ml bahan uji 20% + kuman, tabung 2 berisi 1 ml bahan

uji 10% + kuman, tabung 3 berisi I ml bahan uji 5% + kuman,

tabung 4 berisi 1 ml bahan uji 2,5% + kuman, dan seterusnya

sampai tabung 10. Tabung 11 berisi media tanpa kuman dan

tabung 12 berisi kuman tanpa bahan uji.

Pengukuran hasil penelitian

Daya antibakteri dan ekstrak pinang (Areca catechu) de-

ngan teknik Macro Broth Dilution akan ditujukkan tidak tim-

bulnya kekeruhan pada kadar tertentu. Pengamatan dilakukan

dengan mata biasa untuk menyatakan keruh tidaknya, kemudian

ditentukan MICnya. Pengamatan pada metode Kirby Bauer

adalah adanya zone hambatan yang dapat diukur dengan mistar

kemudian dibandingkan dengan kontrol yang ada.

HASIL DAN PEMBAHASAN

Pada penelitian ini, pertama-tama dilakukan uji daya anti-

bakteri dengan teknik difusi sumuran Kirby Bauer. Bahan uji

yang dipakai terdiri dari dua bahan yaitu sediaan infus 20 g% dan

sediaan ekstrak 20 g%. Data yang diperoleh ditabulasi berdasar-

kan MIC (Minimal Inhibition Concentration) adalah sebagai

berikut.

Tabel 1. Zone radikal E. coli dan S. aureus dengan kadar infusa 20 g %

dan ekstrak

zone radikal (mm) S. aureus

zone radikal (mm) E. coli

No.

Infusa Ekstrak Infusa Ekstrak

1. 9

2. 8

3. 8

Dari data di atas didapatkan rata-rata zone radikal sediaan

infusa adalah 8,33 mm, sedang sediaan ekstrak adalah 6,00 mm.

Dengan uji t-tes, dengan a = 0.05 didapatkan t tabel adalah 2,132

sedang t perhitungan adalah 3,50, berarti t hitung terletak di

dalam wilayah penolakan sehingga hipotesis nol ditolak. Jadi

terdapat perbedaan zone radikal yang bermakna antara sediaan

infusa 20 g% dan ekstrak 20 g% dengan kemungkinan kesalahan

0,0124 atau p = 1,24% terhadap S. aureus. ini berarti daya

antibakteri yang diperoleh dengan cara infusa lebih kuat dari

pada cara ekstrak. Hal demikian disebabkan karena ekstrak yang

dibuat dengan cara infusa memungkinkan zat antibakteri dalam

hal ini tanin akan lebih banyak yang terlarut dalam air, sehingga

daya antibakterinya Iebih kuat dibanding sediaan ekstrak pada

kadar yang sama.

Sedangkan diameter zone radikal untuk E. coli adalah nol

atau tidak terjadi hambatan. Jadi pertumbuhan E. coli tidak

mampu dihambat oleh sedian infusa maupun ekstrak 20 g%. Hal

tersebut mungkin disebabkan karena ada perbedaan komponen

dinding sel antara bakteri gram positip dan bakteri gram negatip.

Komponen khusus dinding sel bakteri gram positip terdiri dari

asam teikhoat, asam teikhuronat dan polisakarida, sedangkan

komponen khusus dinding sel bakteri gram negatip terdiri dari

lipoprotein, selaput luardan lipopotisakarida. Selaput luar dinding

sel bakteri gram negatip merupakan selaput ganda fosfolipid

yang sebagian besar diganti dengan inolekul lipopolisakarida.

Selaput luar mempunyai sifat permeabilitas terhadap zat terlarut

bermolekul rendah sehingga zat aktif yang ada pada infusa

maupun ekstrak pinang tidak dapat masuk ke dalam sel bekteri,

akibatnya bakteri tidak dirusak atau dihambat pertumbuhan-

nya

(8)

Pada tahap selanjutnya dilakukan uji daya hambat kuman

dengan teknik Macro Broth Dilution untuk mencari MIC

(Minimal Inhi bition Concentration)dari masing-masing sediaan

(Tabel 2).

Tabel 2. Zone radikal E. coli dan S. aureus dengan kadar infusa 20 g %

dan ekstrak

M I C (g%) S. aureus

M I C (G%) E. coli

No.

Infusa Ekstrak Infusa Ekstrak

1,25

Tumbuh semua

1,25

2,5

Tumbuh semua

1,25

2,5

Tumbuh semua

Dari data di atas didapatkan rata-rata MIC sediaan infusa

adalah 1,25 g%, sedang rara-rata MIC sediaan ekstrak adalah

2,08 g%. Dengan uji t-tes yang menggunakan tingkat keper-

cayaan 90% didapatkan nilai probabilitas 0,0581. t tabel dengan

kepercayaan tersebut adalah 1,533, sedang t hitung adalah 2,00.

Dengan demikian t terletak di luar wilayah penerimaan, sehingga

dapat dikatakan terdapat perbedaan yang bermakna antara MIC

(Minimal Inhibition Concentration) sediaan infusa dan ekstrak

biji pinang terhadap S. aureus. Hal ini berarti bahwa kadar

minimal yang digunakan untuk menghambat S. aureus dengan

sediaan infusa lebih kecil daripada ekstrak. Hal tersebut dise-

babkan karena pemanasan memungkinkan zat aktif dan biji

pinang mudah larut.

Setelah dilakukan uji dilusi antara sediaan infusa dan ekstrak

dengan E. coli ternyata semua tabung tidak menunjukkan adanya

kadar hambat minimal.Dengan demikian dapat dikatakan bahwa

pertumbuhan E. coli tidak dapat dihambat oleh sediaan infusa

maupun ekstrak biji pinang.

KESIMPULAN

1) Sediaan infusa dan ekstrak biji pinang mempunyai daya

antibakteri terhadap S. aureus, sedang terhadap E. coli tidak.

2) Diameter hambatan rata-rata sediaan infusa biji pinang

adalah 8,33 mm sedang ekstrak adalah 6 mm.

3) Terdapat perbedaan diameter zone radikal (zone hambatan)

antara sediaan infusa dan sediaan ekstrak terhadap S. aureus.

4) Rata-rata MIC (Minimal Inhibition Concentration) adalah

1,25 g% pada sediaan infusa dan 2,08 g% pada sediaan ekstrak

terhadap S. aureus.

SARAN

1) Perlu dilakukan penelitian lanjut tentang daya antibakteri

Cermin Dunia Kedokteran No. 109, 1996 23

biji Pinang invivo (pada hewan coba).

2) Perlu dilakukan penelitian lebih jauh mengenai mekanisme

mengapa sediaan infusa dan ekstrak tidak mampu menghambat

pertumbuhan E. coli.

KEPUSTAKAAN

Sumarni. Pengujian Manfaat Bahan Alam untuk Pengobatan Cacing

Nernatoda Usus di Yogyakarta, Phytomedica 1991; 1(4).

2. Departemen Kesehatan RI. Tanaman Obat Indonesia, Direktorat Jendral

Pengawasan Obatdan Makanan, Departemen Kesehatan RI. Jakarta, 1985.

3. Kloppenberg J, Versteegh. Petunjuk Lengkap mengenai Tanam-tanaman

Obat di Indonesia dan Khasiatnya sebagai Obat-obatan Tradisional, Yayasan

Dana Syah Tua, Yogyakarta, 1983.

4. Departemen Pendidikan dan Kebudayaan, Pengobatan Tradisional pada

Masyarakat Pedesaan Daerah Lampung, Depdikbud Direktorat Sejarah dan

BudayaTradisional Proyek Inventaris dan Dokumentasi Kebudayaan daerah

Lampung, Lampung, 1991.

5. Clause EP, Tyler EV, Brady RL.Pharrnacognosy, 6 th ed, Philadelphia:

Lea & Febiger, 1988

6. Robbers EJ, Brady RL, Tyler EV. Pharmacognosy, 9 th ed, Philadelphia:

Lea & Febiger, 1988.

7. Bonang G, Koeswardono ES. Mikrobiologi Kedokteran untuk Laborato-

rium dan Klinik. Jakarta: Grainedia, 1982.

8. Jawetz E, Melnick JL, Adelberg EA, Brooks GF. Butel iS, Orston LN,

Medical Mikrobiology, 18th. ed. Lange, Appleton & Lange, San Mateo,

California 1989.

9. Orskov F. Indiana Materia Medica, ed. Peshawar, 1955.

10. Cruickshank R, Dunguid JP, Mannion BP, Swain RHA. Medical Micro-

biology : a Guide to the Laboratory Diagnosis and Control Infection, ed

12, Vol. 1. The English Language Book Society and Churchill, Livingstone:

1973.

11. Pelczar MJ. Chan ECS, Dasar-dasar Mikrobiologi, Universitas Indonesia

Press, Jakarta, 1988.

Cermin Dunia Kedokteran No. 109, 1996