MASTER MINI KADATE

CDK 170/vol.36 no.4/Juli - Agustus 2009

257

HASIL PENELITIAN

CDK 170/vol.36 no.4/Juli - Agustus 2009

258

HASIL PENELITIAN

PENDAHULUAN

Istilah HIV (Human Immunodeficiency Virus) pertama kali di-

gunakan sejak tahun 1986

(1)

sebagai penyebab AIDS (Acquired

Immune Deficiency Syndrome) yaitu sindrom akibat penurunan

sistem kekebalan tubuh

(2)

. Nama HIV pertama kali diusulkan

oleh Luc Montagnier dari Perancis. HIV awalnya bernama LAV

(lymphadenopathy-associated virus)

(3,4)

, kemudian Robert Gallo

dari Amerika Serikat memberi nama HTLV-III (human T lympho-

tropic virus type III)

(5)

HIV termasuk dalam familia retrovirus, subfamilia lentiviridae.

Virion bulat, berdiameter 80-100 nm, core silindris, dan memiliki

amplop. Genom yaitu RNA beruntai tunggal, lurus, positive-sense,

berukuran 9-10 kb

(6)

. Memiliki glikoprotein pada amplop, enzim

transkriptase terkandung di dalam virion, dan protease digunakan

untuk memproduksi virus infeksius

(7)

Gambar 1. Struktur HIV

Sumber : http://id.wikipedia.org/wiki/Berkas:HIV_Viron.png

Dua tipe HIV yang menginfeksi manusia yaitu HIV-1 dan HIV-2.

Tipe HIV-1 lebih virulen dan mudah menular sedanglan HIV-2

umumnya masih terisolasi di Afrika Barat

(8,9).

Diduga HIV pada

manusia berasal dari infeksi silang SIV (Simian Immunodeficiency

Virus) di Afrika Barat dan Tengah

(10)

HIV menginfeksi sel sistem kekebalan tubuh manusia dengan

menggunakan dua reseptor, yaitu reseptor non-CD4 untuk fusi

virus dengan membran dan reseptor CD4 yang diekspresi pada

makrofag dan limfosit

(7)

MAKSUD, TUJUAN, DAN KEGUNAAN PENELITIAN

Maksud penelitian ini untuk mempelajari deteksi RNA HIV

penyebab AIDS (Acquired Immune Deficiency Syndrome)

menggunakan perangkat diagnostik Cobas Amplicor® Roche.

Tujuannya untuk mengetahui kemampuan sistem Cobas Ampli-

cor dalam mendeteksi keberadaan HIV dalam sampel. Kegunaan

penelitian ini adalah untuk penguji tingkat akurasi teknik Cobas

Amplicor sebagai salah satu cara deteksi dini infeksi HIV.

BAHAN DAN CARA KERJA

Bahan: reagen HIV-1 lysis, HIV-1 quantitation standard, HIV-1

spesimen diluents, NHP (Negative Human Plasma), HIV-1 negative

control, HIV-1 Low (+) control, HIV-1 High (+) control, HIV-1 Master

Mix, HIV-1 Mn2+, HIV-1 microwell plate, detanuration solution,

hybridization buffer, AV-HRP (Avidin-Horseradish Peroxidase Conju-

gate), substrat A, substrat B, stop reagen, dan wash concentrate.

Cara Kerja: pengujian sampel menggunakan perangkat diagnostik

Cobas Amplicor. Penelitian dimulai dengan pengambilan sampel,

persiapan reagen, isolasi asam nukleat, persiapan kontrol, ampli-

fikasi, hibridisasi, dan deteksi.

HASIL DAN DISKUSI

Cobas Amplicor adalah suatu teknologi canggih dan sensitif

untuk menghitung jumlah materi genetik virus HIV di dalam darah.

Cobas Amplicor yang akurat dan sensitif memiliki kemampuan

deteksi secara konsisten, spesifisitas yang tinggi, dan reprodusi-

bilitasnya baik

(11)

Tahap awal pemeriksaan HIV dengan Cobas Amplicor adalah

preparasi spesimen sesuai prosedur standar. RNA HIV-1 diisolasi

dari plasma sel yang dilisis menggunakan reagen working HIV-1

lysis diikuti presipitasi RNA dengan alkohol. RNA yang sudah

terisolasi ditambahi HIV-1 specimen diluents, stabil selama 2 jam

atau disimpan pada suhu -210 C

(12)

. Isolasi RNA dari setiap sampel

dimasukkan ke dalam tabung microamp yang sudah mengandung

working master mix untuk memasuki tahap amplifikasi.

Gambar 3. Cobas Amplicor System (1) lokasi thermal cycler heating/

cooling blocks, (2) pipet otomatis, (3) incubator, (4) tempat pencucian,

dan (5) fotometer.

Sumber : DiDomenico dkk, 1996

Perbanyakan dilakukan dengan membentuk cDNA dari RNA

target. Hasil amplifikasi akan

(13,14)

didenaturasi dengan menggu-

nakan detanuration solution untuk memasuki tahap hibridisasi.

Amplikon akan berikatan dengan probe SK102 dan CP35 dalam

MWP (Micro Well Plate). Keberhasilan suatu hibridasasi ditentukan

oleh deteksi dengan penambahan AV-HRP (Avidin-Horseradish

Peroxidase Conjugate) dan TMB (Tetramethylbenzidine). Proses

amplifikasi, hibridisasi, dan deteksi dilakukan oleh Cobas Amplicor

System secara otomatis.

Gambar 4. Sistematik mekanisme kerja Cobas Amplicor System.

Sumber : DiDomenico dkk, 1996

Prinsip kerja Cobas Amplicor berdasarkan pada amplifkasi meng-

gunakan teknologi PCR (Polymerase Chain Reaction)

(11).

Prinsip

kerja PCR adalah menghasilkan kopi berlipat ganda dari sekuen

nukleotida organisme target yang dapat mendeteksi target orga-

nisme dalam jumlah sangat rendah dengan spesifisitas tinggi

(15)

Dalam prosesnya asam nukleat virus yang ada di dalam darah

sampel akan digandakan berulang-ulang sehingga didapat jutaan

kopi. Amplikon yang didapatkan akan direaksikan dengan reagen

spesifik sehingga dapat dihitung jumlah partikel virus HIV dalam

setiap mililiter darah yang diperiksa. Hasil pemeriksaan dilaporkan

dalam copies/mL atau dalam perhitungan matematika logaritma (Log).

Tabel Nilai Log pada Pasien :

Aplikasi Cobas Amplicor System dalam

Deteksi Dini Infeksi HIV

(Human Immunodeficiency Virus)

Sinta Sasika Novel

, Runingsih

1. Jurusan Biologi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Padjadjaran,Bandung,Indonesia

2. Staf Laboratorium Patologi Klinik Rumah Sakit Kanker Dharmais, Jakarta, Indonesia

ABSTRAK

Penelitian aplikasi Cobas Amplicor System dalam Deteksi Dini Infeksi HIV (Human Immunodeficiency Virus) dimaksud-

kan untuk mempelajari deteksi RNA HIV penyebab AIDS (Acquired Immune Deficiency Syndrome) menggunakan

perangkat diagnostik Cobas Amplicor® Roche. Tujuan penelitian ini adalah menilai kemampuan sistem Cobas

Amplicor untuk mendeteksi keberadaan HIV dalam sampel. Kegunaan penelitian ini adalah untuk penguji tingkat

akurasi teknik Cobas Amplicor sebagai salah satu cara deteksi dini infeksi HIV. Hasil dari 18 pasien adalah 3 pasien

negatif, 8 pasien positif low, dan 7 pasien positif high. Nilai Log dari 3 pasien negatif: pasien 1 (2.744), pasien 8

(2.924), pasien 17 (1.996); 8 pasien positif low: pasien 2 (4.088), pasien 3 (3.526), pasien 4 (4.639), pasien 5 (4.459),

pasien 6 (4.078), pasien 7 (3.719), pasien 15 (4.152), pasien 18 (3.064); 7 pasien positif high: pasien 9 (5.441), pasien

10 (6.198), pasien 11 (5.128), pasien 12 (5.608), pasien 13 (5.825), pasien 14 (5.074), pasien 16 (6.157).

Kata kunci : AIDS, Cobas Amplicor System, HIV, Log, RNA.

Pasien Kode Pasien HIV-RNA

LOG

Hasil

Copies/mL

Kontrol (-)

644

2.809

Negatif

Kontrol L(+)

5,378

3.731

Positif low

Kontrol H(+)

422,372

5.626

Positif high

Pasien 1

HE009061

555

2.744

Negatif

Pasien 2

HE009062

12,232

4.088

Positif low

Pasien 3

HE009063

3,357

3.526

Positif low

Pasien 4

HE009064

43,522

4.639

Positif low

Pasien 5

HE009065

28,783

4.459

Positif low

Pasien 6

HE009066

11,970

4.078

Positif low

Pasien 7

HE009067

5,236

3.719

Positif low

Pasien 8

HE009068

840

2.924

Negatif

Pasien 9

HE009069

276,089

5.441

Positif high

Pasien 10

HE080541

1,576,687

6.198

Positif high

Pasien 11

HE080542

134,167

5.128

Positif high

Pasien 12

HE080543

405,858

5.608

Positif high

Pasien 13

HE080544

667,949

5.825

Positif high

Pasien 14

HE080545

118,514

5.074

Positif high

Pasien 15

HE080546

14,186

4.152

Positif low

Pasien 16

HE080547

1,434,057

6.157

Positif high

Pasien 17

HE080548

1.996

Negatif

Pasien 18

HE080549

1,158

3.064

Positif low

Gambar 2. Infeksi HIV ke dalam

sel makrofag (1) virus menempel

pada membran sel dengan adanya

reseptor CD4 dan non-CD4, (2)

virus melalukan fusi dengan mem-

brane sel inang serta mengeluar-

kan asam nukleat, (3) asam nukleat

virus menyisip pada DNA sel inang,

(4) terbentuk mRNA dan mRNA

membentuk protein, (5) perakitan

virion, dan (6) virus baru terbentuk.

Sumber : http://aidsinfo.nih.gov