Cermin Dunia Kedokteran

Artikel

HASIL PENELITIAN

Efek Antikanker Isolat Flavonoid

dari Herba Benalu Mangga

(Dendrophtoe petandra)

Sukardlman, IGP Santa, Rahmadany

Fakultas Farmasi Universitas Airlangga, Surabaya

ABSTRAK

Telah dilakukan pengujian aktivitas antikanker dari isolat flavonoid dari herba

benalu mangga (Dendropthae petandra). Untuk bewan coba digunakan mencit betina

yang menderita kanker pada daerah interskapuler (tengkuk) dari hasil induksi dengan

benzopirena.

Isolasi flavonoid dilakukan dengan maserasi secam bertahap menggunakan pe-

larut : heksan, kloroform dan etanol. Dari eksirak etanol dilakukan fraksinasi dengan

kolom cepat dan digunakan pelarut diklorometan - etanol secara bertingkat.

Sediaan isolat flavonoid diberikan secara intraneoplasma selama 7 kali penyun-

tikan dengan interval 2 hari sekali. Untuk evaluasi antikanker digunakan parameter

volume kanker dan irisan anatomi histologi jaringan kanker.

Hasil penelitian menunjukkan pada dosis 2,44 mg/0,2 ml, isolat flavonoid herba

benalu mangga (Dendropthoe petandra) mampu menghambat pertumbuhan kanker

pada mencit (p < 0,05).

PENDAHULUAN

Salah satu metode yang digunakan dalam pengembangan

dan penemuan obat antikanker dari babas bioaktif tanaman

menggunakan hewan coba mencit yang dibuat kanker dengan

induksi benzopirena, N-metil-N-nitrosourea, 3-metilkolantrena;

evaluasi parameter antikanker dengan penghambatan pertum-

buhan kanker dan data anatomi-histologi

(1,2,3)

Pada penelitian ini dipilih isolat flavonoid dari herba benalu

mangga (Dendropthoe petandra), berdasarkan pada pengguna-

an secara tradisional sebagai obat kanker, sera adanya laporan

penelitian yang menyatakan bahwa Isolat flavonoid dari benalu

mangga (Dendropthoe petandra) dapat menghambat pertum-

buhan Artemia sauna Leach

(1)

. Anemia salina Leach adalah

hewan coba yang digunakan untuk praksrining aktivitas anti-

kanker di National Cancer Institute, Amerika Serikat

(2)

TUJUAN PENELITIAN

Menguji aktivitas antikanker isolat flavonoid benalu

mangga (Dendropthoe petandra) pada mencit yang menderita

kanker karena induksi dengan benzopirena.

BAHAN DAN METODE

Isolasi flavonoid

Isolasi flavonoid dilakukan dengan maserasi secara ber-

tahap menggunakan pelarut : heksan, kloroform dan etanol.

Dari ekstrak etanol dilakukan fraksinasi dengan kolom cepat

dan digunakan pelarut diklorometan - etanol dengan perban-

dingan secara bertingkat.

Hewan percobaan

Hewan yang digunakan dalam penelitian ini adalah mencit

putih betina galur BALB-C, berusia sekitar dua bulan. Kanker

dibuat dengan menyuntikkan larutan benzopirena dalam oleum

olivarum secara subkutan pada daemh interskapuler (tengkuk)

dengan dosis 0,3 mg/0,l ml selama 10 kali dengan interval 2

hari sekali. Benjolan kanker pada mencit akan mulai tumbuh

Cermin Dunia Kedokteran No. 122, 1999 5

setelah dua bulan penyuntikan benzopirena.

Hewan coba dibagi dalam 4 kelompok yang masing-

masing terdiri dari lima ekor mencit :

Kelompok kontrol (tanpa pemberian isolat flavonoid)

Kelompok yang diberi flavonoid dengan dosis 0,56 mg/

0,2 ml

Kelompok yang diberi flavonoid dengan dosis 1,12 mg/

0,2 ml

Kelompok yang diberi flavonoid dengan dosis 2,24 mg/

0,2 ml

Pemberian Isolat dan pengakuran aktivitas antikanker

Hewan coba yang menderita kanker diberi isolat flavonoid

secara intraneoplasma dengan dosis di etas sebanyak 7 kali

penyuntikan dengan interval waktu 2 hari sekali.

Pengukuran volume kanker dilakukan dengan cara mem-

buat cetakan dari malam (wax) yang ditempelkan pada benjolan

kanker; kemudian malam diangkat dan diisi dengan air.

Banyaknya air yang diisikan pada bentukan malam tersebut

sebanding dengan volume kanker.

Irisan anatomi histologi jaringan kanker dilakukan pada

kelompok kontrol dan kelompok yang pada perhitungan

statistik diketahui memiliki efek antikanker secara bermakna.

Analisis data

Untuk mengetahui adanya pengaruh aktivitas isolat fla-

vonoid dari herba benalu mangga (Dendropthoe petandra)

terhadap kanker mencit dilakukan analisis statistik dengan

metode T-student.

HASIL DAN PEMBAHASAN

Isolasi flavonoid dilakukan secara maserasi bertahap dan

dilanjutkan dengan kromatografi kolom cepat, karena senyawa

flavonoid lebih mudah tertarik pada pelamt etanol sedangkan

senyawa selain flavonoid yang bersifat nonpolar dan semipolar

akan tertarik pada pelarut heksan dan kloroform; Hal ini akan

mempermudah pemurnian terhadap flavonoid.

Pemilihan penggunaan benzopirena sebagai inducer kanker

pada mencit, didasarkan pada pengalaman peneliti yang cukup

baik; tidak terjadi infeksi atau memborok, waktu penyuntikan

sampai timbulnya kanker relatif cepat (kurang lebih dua bulan).

Tabel 1 memperlihatkan hasil pengukuran volume kanker

rata-rata pada kelompok kontrol mencit yang tidak diberi isolat

flavonoid pada hari pengamatan ke 0, 2, 4, 6, 8, 10, 12 dan 14.

Dan volume kanker yang diperoleh kemudian ditentukan

persen pertumbuhan kumulatif yang nantinya akan digunakan

dalam perhitungan statistik T-student test.

Hasil analisis T-student test terhadap kelompok II dengan

perlakuan dosis 0,56 mg/0,2 ml dapat dilihat pada Tabel 2.

Perlakuan dengan dosis I sebesar 0,56 mg/0,2 ml pada peng-

amatan had ke 0 sampai ke 14 tidak menyebabkan perbedaan

bermakna antara kelompok kontrol dengan kelompok

perlakuan, pada derajat kepercayaan p < 0,05.

Hasil perlakuan dengan dosis II (1,12 mg/0,2 ml) terhadap

pertumbuhan kanker mencit dapat dilihat pada label 3. Dari

hasil tersebut terlihat bahwa dengan perlakuan dosis II masih

belum menunjukkan adanya hambatan terhadap pertumbuhan

Tabel 1. Hasil pengukuran volume kanker mencit pada kelompok kontrol

Hari

pengamatan

Nilai rata-rata

volume kanker

(mm

)

Jumlah hewan

Persen

pertumbuhan

(kumulatif)

591,25

630

675

718,75

761,25

802,5

845

885

100

1067

114,3

121,8

129,0

136,0

143,3

150,1

Tabel 2. Hasil analisis T-student pada kelompok uji I (dosis 0,56 mg/0,2

ml)

Hari

Volume

rata-rata

kanker

(mm

)

Persen

pertumbuhan

kumulatif

(Kel.I)

Persen

pertumbuhan

kumulatif

(Kel.kontrol)

Signifikasi

616,25

657,5

701,25

746,25

786,25

830

883,75

917,5

100

106,8

114

121,4

128,0

135

142

149,4

100

106,7

114,3

121,8

129

136

143

150

Keterangan : ts = tidal signnifikan

Tabel 3. Hasil analisis T-student pada kelompok uji II (dosis 1,12 mg/0,2

ml)

Hari

Volume

rata-rata

kanker

(mm

)

Persen

pertumbuhan

kumulatif

(Kel.II)

Persen

pertumbuhan

kumulatif

(Kel.kontrol)

Signifikasi

631,25

671,5

711,25

753,75

795

836,25

881,25

927,5

100

106,6

113

119,8

126,0

133,3

140

148,1

100

106,7

114,3

121,8

129

136

143

150

Keterangan : ts = tidak signifikan

kanker dari mencit.

Pemberian dosis III 2,24 mg/0,2 ml mulai menunjukkan

perbedean antara kelompok kontrol dengan kelompok perlaku-

an, t hitung kelompok ini pada hari ke-4 sampai dengan hari

ke-141ebih besar dari t tabel; dengan demikian isolat flavonoid

pada dosis 2,24 mg/0,2 ml yang diberikan trap interval waktu

2 hari kali selama tujuh tali dapat menghambat pertumbuhan

kanker mencit yang diinduksi dengan benzopirena.

Dengan melihat hasil demikian, kemungkinan besar dosis

III sebesar 2,24 mg/0,2 ml baru merupakan dosis awal terapi

(pengobatan) yang seharusnya digunakan dalam penelitian.

Senyawa flavonoid dari benalu secara umum adalah se-

nyawa kuersetin (Hegnauer, R., 1966); yang ternyata bersifat

inhibitor terhadap enzim DNA topoisomerase sel kanker

Cermin Dunia Kedokteran No. 122, 1999

(Andreas, C., et. al. 1995). Enzim tersebut adalah enzim yang

berperan dalam proses replikasi, transkripsi dan rekombinasi

DNA dan juga proses proliferasi dan diferensiasi sel kanker;

enzim ini merupakan target baban bioaktif tanarnan yang me-

miliki aktivitas antikanker, karena dengan dihambatnya enzim

DNA topoisomerase maka proses dalam sel alum terhenti dan

akhirnya Akan terjadi kematian sel tersebut

(1,3)

Pada penelitian ini belum ditentukan jenis senyawa fla-

vonoid dari hasil isolasinya; hanya digunakan reaksi penetapan

kualitatif dengan reaksi warna dan Kromatografi Lapis Tipis

(KLT) yang menunjukkan bahwa Slat tersebut adalah senyawa

flavonoid. Tidak adanya kuersetin bukan berarti tidak ada

aktivitas antikanker, karena ada laporan lain yang menyatakan

bahwa senyawa flavonoid jenis lain seperti metiltrisetin mampu

menghambat aktivitas enzim DNA topoisomerase sel kanker

(4)

Tabel 4. Hasil analisis T-student pada

kelompok uji III dosis

2,24 mg/0,2 ml

Tabel 4. Hasil analisis T-student pada kelompok uji III (dosis 2,24 mg/0,2

ml)

Hari

Volume

rata-rata

kanker

(mm

)

Persen

pertumbuhan

kumulatif

(Kel.III)

Persen

pertumbuhan

kumulatif

(Kel.kontrol)

Signifikan

655

691.25

717.5

740

765

786,25

850

921.25

100

105,6

109.7

113

116,9

120.4

130.2

141,2

100

106,7

114,3

121,8

129

136

143

150

p < 0,05

p<0,05

p <0,05

p<0,05

Keterangan : ts

tidak

signifikan

p<0,05 =

signifikan

(bermakna)

Untuk melihat efek antikanker dari isolat flavonoid dapat

digunakan grafik pertdmngan persentase pertumbuhan kumu-

latif sel kanker dari kelompok kontrol dan kelompok perlakuan

dosis I, II, III terhadap hari pengamatan (Gambar 1).

Terlihat bahwa dosis I dan II pada kelompok perlakuan

dibanding dengan kelompok kontrol sudah mulai menyebabkan

perbedaan; volume kanker rata-rata kedua dosis tersebut di

bawah volume kanker rata-rata kelompok kontrol, namun ter-

nyata secara statistik dengan uji T-student tidak berbeda ber-

makna Sedang untuk perlakuan dosis III (2,24 mg/0,2 ml)

terlihat sangat nyata adanya perbedaan pertumbuhan kanker

kumulatif dari kelompok kontrol dengan kelompok perlakuan

dosis III yang mulai hari ke 4 sampai hari ke 14 pengamatan

pertumbuhan kankernya semua di bawah kurva kelompok

kontrol. Hal ini juga ditunjang dengan analisis statistik yang

menunjukkan perbedaan bermakna pada p < 0,05.

Analisis histologi jaringan kanker, khususnya pada kanker

dad kelompok perlakuan dosis III (2,24 mg/0,2 ml dapat dilihat

pada Gambar 2; terlihat adanya sel nekrosis dan fuse adanya

sel inti yang mulai mengecil dan memadat.

Dengan demikian diperoleh korelasi positif antara uji

aktivitas antikanker dengan metode pengukenan volume kanker

dengan metode anatomi dan histologi jaringan kanker.

Keterangan: K = Kelompok kontrol

Kelompok

(dosis

0,56

mg/0,2

ml)

Kelompok

(dosis

1,12

mg/0,2

ml)

III

Kelompok

III(dosis

2,24mg/0,2

ml)

Gambar

1. Grafik persen pertumbuhan kanker terhadap waktu (hari).

Keterangan : 1. Sel nekrosis

inti

sel

memadat

dan

mengecil

Gambar 2.Irisan anatomi jaringan kanker yang diberi isolat Flavonoid pada

dosis

III

(2,24

mg/0,2

ml)

KESIMPULAN DAN SARAN

Hasil penelitian menunjukkan bahwa pada dosis 2,24 mg/

0,2 ml, isolat flavonoid dari herba benalu mangga (Dendropthoe

petandra) mampu menghambat pertumbuhan kanker pada

mencit yang diinduksi (Ragan benzopirena (p < 0,05).

Perlu dilakukan identifikasi dan karakterisasi dari isolat

flavonoid dengan spektra : UV, IR, MS dan NMR.

Cermin Dunia Kedokteran No. 122, 1999 7